Tecnicas De Estudio

Question 1

Mencionar 2 tecnicas de estudio

Answer 1

-con acidos nucleicos
-con proteínas

Question 2

Tecnicas de trabajo con acidos nucleicos

Answer 2

Ácido desoxirribonucleico, ADN
Ácido ribonucleico, ARN
PCR en tiempo real o cuantitativo

Question 3

Acido desoxirribonucleicos

Answer 3

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) Técnica que permite amplificar y tener miles o millones de copias de un segmento particular de ADN.

Question 4

Acido desoxirribonucleicos

Answer 4

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) Técnica que permite amplificar y tener miles o millones de copias de un segmento particular de ADN.

Question 5

Reaccion de cadena polimerasa :
- mencionar a cual tecnica corresponde
-para que sirve?
-que se necesita(5)

Answer 5

Corresponde a la tecnicas de acidos dexorribonucleicos
-puedo tener millones de copias de ADN
-sirve para ver si un trozo de ADN esta presente o no.
Se necesita: ADN molde, enzima ADN polimerasa termoestable, partidores o cebadores, -dNTPs (dATP, dTTP, dCTP, dGTP)-Termociclador

Question 6

Desnaturalización del ADN : ¿ que ocurre?

Answer 6

Se separa de la doble helice(rompimiento de los puentes de hidrógenos)

Question 7

Temperatura melting

Answer 7

El 50% de las hebras de ADN de una secuencia especifica estan separadas
Ocurre a 72 grados

Question 8

Procedimiento de reaccion cadena polimerasa:
-procedimiento
-quien lo realiza?
Finalidad

Answer 8

-La t aumenta a 96 grados para desnaturalizar el ADN ( separar los dos hebras)
-Disminuye la t a 55 grados para templar (unir) los cebadores( obtiendo unos moldes para que puedan unirse los cebadores) ( cebaforas se unen a las secuencias de ADN)
-Se vuelve a aumentar la t a 72 grados para extender los cebadores ( aquí entra la polimerasa la cual nos permite extender los cebadores) (la Taq polimerasa agrega nucleotidos
-Se repite el ciclo 25 a 35 veces
●este proceso lo hace el termociclador

Finalidad: clonar para ADN en un plasmido

Question 9

Como se visualizan los resultados de pcr

Answer 9

Usando electroforesis en gel

Question 10

gel de agarosa para un PCR: que hace?

Answer 10

permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma.

Question 11

Sinonimo de pcr

Answer 11

Reacciòn de cadena polimerasa

Question 12

Electroforesis en gel:
En que consiste
Composición

Answer 12

Se compone de gel+carga
tengo un gel incrustado en una solución buffer
La solución buffer se compone de agua+sal

Question 13

Que realiza la solución buffer

Answer 13

Mantiene ph en un rango adecuado.
El ph si sale del rango afectaria el rango.

Question 14

Escalera de ADN

Answer 14

Es un conjunyo de estandares que se usan para identificar el tamaño aproximaxo de la banda observada en pares.

Question 15

Tecnica de Acido ribonucleico(ARN) :
¿ con que cosa se genera?
¿ que ocurre?
¿ que muestra?
¿ como se hace?
¿ que enzima participa principalmente?

Answer 15

Ocurre con transcripción reversa
Sintetiza ADN complementario (ADNc) a partir de ARNm con ayuda de la transcriptasa inversa y luego usa la pcr para amplificar las regiones de interes
-muestra la expresión de un gen, no la presencia de uno.
-se extrae ARN de una célula, sigue pasos de pcr convencional se convierte de ARN a ADN complementario.

Question 16

¿ que contiene el ADN ?

Answer 16

Adn contiene exones e intrones.

Question 17

¿ que le pasa al ARN al transcribirse?

Answer 17

Tiene splicing, donde se le sacan los intrones

Question 18

Retro transcripción¿ que se hace? ¿ a partir de que se hace?

Answer 18

Se hace a través de la enzima retro transcriptasa reversa
Se amplifica el ADN a partir de un pcr convencional en donde el templado(hélice molde) va a ser el ADNc

Question 19

Interpretación de un gen con analisis cuantitativo

Answer 19

Analisis cuantitativo: existe o no el gén de interés

Question 20

Interpretación deun gen con analisis cualitativo

Answer 20

Responde a que tanto se expresa un gen

Question 21

¿ que permite el pcr en tiempo real?
¿ que ocurre con la sonda?
-que ocurre con la señal de fluorescencia

Answer 21

Permite ver la generación de ADN, se usa un termociclador para detectar el producto amplificado
-la sonda se une a la doble cadena junto a la alineación del partidor
La señal de fluorescencia aumenta directamente proporcional con el ADN amplificado

Question 22

Que es el ct

Answer 22

Es un ciclo donde se cruza punto de detección.
Cuando menor es el Ct, mayor es la concentración del parametro estudiado en la muestra

Question 23

-TÉCNICAS DE TRABAJO CON PROTEÍNAS

Answer 23

Wester Blot
-ELISA
-Inmunohistoquímica-Inmunofluorecencia

Question 24

Western blot:
función
como se realiza

Answer 24

Permite identificar proteínas por su peso molecular y cuantificar su cantidad relativa de la proteína de la muestra
Proteínas son separadas por un gel según su peso molecular en un gen desnaturalizante, y son transportadas hacia donde tengo el anticuerpo en contra de la proteína de interés.

Question 25

Primera etapa de western blot

Answer 25

-Separación de proteínas por ELECTROFORESIS
Permite separar moleculas cargadas
Se usa un detergente que da carga negativa a las proteínas(se rompen los enlaces covalentes)
Se aumenta la temperatura para romper puentes de H
Debo sacar las proteinas de su proteina cuaternaria, para ello debo usar un desnaturalizante.

Question 26

Segunda etapa de western

Answer 26

identificación de proteínas en forma específica algunas de las técnicas que reconocen proteínas es el reconocimiento por anticuerpos, esto debido a la especificidad de la interacción antígeno-anticuerpo.

Question 27

Analisis cualitativo

Answer 27

La proteina de interes se expresa en todas las células

Question 28

Analisis cuantitativo

Answer 28

No se puede realizar necesito tener un ensayo WB.

Question 29

Anticuerpos policlonales

Answer 29

Pueden unirse a muchos epitopos de un solo antigeno.

Question 30

Anticuerpos monoclonales

Answer 30

Reconocen a un mismo epitopo de un antígeno

Question 31

Epitopo

Answer 31

Parte de una molecula que sera reconocida por un anticuerpo

Question 32

ELISA

Answer 32

Un antígeno o anticuerpo inmovilizado se une a un antigeno o anticuerpo, y este despues se une a una enzima que produce una reacción de color.

Question 33

ELISA ¿ QUE PERMITE?

Answer 33

Permita determinar la presencia de una proteina también cuantifica la cantidad exacta de proteínas

Question 34

Proteínas inmunohistoquímicas
¿ que anticuerpos se usa y a que se relacionan?
¿ para que sirven?

Answer 34

Se usa un anticuerpo primario especifica para la proteína de interés y un anticuerpo secundario unido a una actividad enzimatica
Se usa para identificar la ubicación de una proteina

Question 35

Diferencias de ELISA y western blot

Answer 35

Elisa: sencillo, rapido, se usa con antigenos y anticuerpos.
Western blot: mas complejo, toma más tiempo, se usa con antigenos.