Técnicas de biología molecular Flashcards
En biología molecular, se conoce como astringencia
Al grado de interés o afinidad de la sonda por su ácido nucleico diana
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Consiste en la replicación del DNA sin usar plásmidos ni vectores.
Requiere: dNTP (nucleotidos), cebadores (primers, iniciadores o oligonucleótidos), magnesio y potasio (Mg2+ es cofactor de la TaqPol), solución tampón o buffer, DNA polimerasa (TaqPol), DNA molde que se quiere amplificar. (y obviamente un termociclador)
Consta de 3 fases
1- Desnaturalización: Calentando el DNA a 95 ºC se separan las dos hebras.
2- Hibridación: Se une el oligo con su cadena complentaria.
3- Elongación: La TaqPol elonga la cadena a partir del oligo
PCR anidada o nestPCR
El producto de una amplificación es usado como molde para una segunda amplificación.
PCR multiplex o múltiple
PCR en la que se amplifican varias secuencias de DNA diferentes a la vez usando múltiples primers.
RT-PCR
PCR de transcripción inversa
Se basa en la transcripción inversa de una cadena de RNA en una cadena de DNA complementario (DNAc) y la posterior replicación de este.
No confundir con PCR en tiempo real o qPCR
qPCR
PCR en tiempo real o PCR cuantitativa.
Esta reaccion se basa en el uso de dNTP marcados con fluorocromos y la medición de la fluorescencia en uno o varios canales tras cada ciclo de replicación.
Puede ser cuantitativa o semicuantitativa.
No confundir con PCR de transcripción inversa o RT-PCR
Secuenciación de alto rendimiento o next-generation sequencing NGS
Técnica de secuenciación masiva para mapear los nucleótidos de grandes cantidades genoma.
Northern blot
Técnica de detección de moléculas de RNA de una secuencia dada en una mezcla compleja.
Western blot, inmunoblot o electrotransferencia
Técnica para identificar proteínas concretas en una mezcla compleja de proteínas.
Se basa en la separación de proteínas por electroforesis y luego la acción especifica de anticuerpos anti-proteína marcados.
Es la técnica usada para confirmación de VIH positivo.
Southern blot o hibridación Southern
Técnica para detectar la presencia de una secuencia concreta de DNA en una mezcla compleja de DNA.
Se basa en la separación del DNA por electroforesis en gel y su posterior hibridación con una sonda.
Hibridación in-situ cromogénica o CISH
Es una técnica que usa una hebra de DNA o RNA marcado para localizar un DNA o RNA específico en una muestra de tejido.
Es similar a la tecnica FISH pero esta es en el espectro visible en lugar de fluorescencia.
Hibridación fluorescente in-situ o FISH
Se usan sondas de DNA clonado que se unen de manera específica a cromosomas. La fluorescencia característica permite que la coloración sea selectiva.
Se puede usar para detectar alteraciones genéticas, aneuploidías, delecciones, etc
