Técnica Histológica Flashcards
Serie de pasos con los que obtenemos muestras de tejidos que alguna vez estuvieron vivos
Técnica histológica
¿Qué requiere el estudio morfológico de los tejidos?
- Obtención de muestras
- Preparación de laminillas
- Observación al microscopio
Conforman la técnica histológica
- Obtención de muestras
- Preparación de laminillas
¿Cuál es el estudio de rutina?
Tinción con hematoxilina y eosina de muestras fijadas en formalina
Estudios especializados:
- Histoquímica y citoquímica
- Inmunocitoquímica y técnicas de hibridación
- Radioautografía
- Cultivo tisular y celular
- Centrifugación diferencial
- Técnicas especializadas de microscopia
Pasos de la técnica histológica
- Fijación
- Inclusión
- Corte
- Tinción
¿Qué son los artefactos?
Como repliegues o rebordes
¿Por qué es importante la fijación?
- Abolir metabolismo celular
- Impedir autólisis
- Destruir microorganismos patógenos
- Endurecer el tejido
Trata de mantener la misma estructura de las células cuando estaban vivas aunque ahora estén muertas
Fijación
VERDADERO O FALSO: Si la muestra no se fija bien, se puede volver a tratar de fijar
Falso
¿Cuál es el propósito de la fijación?
Llevar al microscopio un preparado en donde los tejidos estén perfectamente preservados, presentando la misma estructura y composición química que tenían cuando estaban vivos
¿Por qué el ideal de la fijación no se alcanza?
Porque en todos los preparados histológicos siempre se presentan ciertos artefactos como consecuencia del proceso que sufrieron
Factores físicos que se utilizan en la fijación para conservar la estructura
- Calor: bacteriología
- Congelación
¿Qué hace el calor en las células eucariotas?
Desnaturaliza las proteínas
¿Cuál es el factor físico [fijación] que se usa en cirugías y es muy rápido?
Congelación
¿Cuál es la técnica estándar para fijar?
Química
Factores químicos que se usan en la fijación para conservar la estructura
- Formaldheído*
- Alcohol etílico
- Ácido pícrico
Los enlaces cruzados se hacen en:
Fijación química
Acción mediante la creación de uniones covalentes entre las proteínas de un tejido
Fijación química
Pasos para la fijación química (enlaces cruzados)
- Proteínas solubles se anclan al citoesqueleto
- Adicionalmente, endurece el tejido
- Formaldehído, paraformaldehido: puentes entre residuos de lisina, reversible
- Glutaraldehído: deforma las estructuras alfa-hélice en las proteínas. No apto para tejido gruesos, irreversible. Amplio uso en microscopia electrónica
En la fijación química ¿qué hacen los precipitantes desnaturalizantes?
Reducen la solubilidad de las moléculas protéicas interrumpiendo las interacciones hidrofóbicas que dan estructura terciaria
por tanto, las proteínas (enzimas) ya no hacen su función
Se utilizan en fijación de muestras congeladas
- Etanol
- Metanol
Técnica que se usa para una fijación más fina
AMEX
¿En qué consiste la técnica AMEX?
Acetona-Metilbenzoato-Xileno
Tipo de fijadores que raramente se usan solos a menos que se quiera estudiar ácidos nucléicos
- Etanol
- Metanol
- Acetona
¿Con qué se pueden usar en conjunto etanol, metanol y acetona? Y ¿para qué?
Ácido acético
Para impedir el endurecimiento y encogimiento excesivo que se genera con alcohol, metanol o acetona solo
VERDADERO O FALSO: el fijador depende de lo que queramos ver
Verdadero
Se usan para ver la formación lipídica del tejido (membranas celulares, organitos membranosos)
Agentes oxidantes
[fijación química] los agentes oxidantes pueden reaccionar con… formando uniones que estabilizan la estructura tisular
Proteínas y otras biomoléculas
Ejemplos de agentes oxidantes
- tetróxido de osmio - fijador secundario en ME
- Dicromato de potasio, ácido crómmico, permanganato de potasio
Principalmente se usan como fijadores secundarios, ya que solos pueden causar desnaturalización extensa y no penetran bien en secciones gruesas de tejido
Agentes oxidantes: tetróxido de osmio y dicromato de potasio
Otros tipos de fijadores químicos
- Mercuriales
- Pícratos
- HOPE
El mecanismo de acción de este fijador es desconocido. Su uso aumenta el brillo de la tinción y permite un excelente detalle de núcleos. Se usa en la fijación de tejido hematopoyético y reticuloendotelial
Mercuriales
Este tipo de fijador reacciona con histonas y otras proteínas básicas para formar picratos cristalinos con aminoácidos y precipitar las proteínas. Preserva bien el glucógeno, extrae lípidos pero puede causar Basofilia en los tejidos
Pícratos
Este fijador es excelente para preservar antígenos en IHQ, buen mantenimiento de RNA y DNA
HOPE
¿Qué significa HOPE?
Hepes-glutamic acid buffered-mediated organic solvent protection effect
Factores que pueden interferir con la fijación
- pH
- Osmolaridad
- Tamaño de la muestra
- Volumen
- Temperatura
- Duración
Rango de pH que se debe de tener en la fijación
7.2 - 7.4
se debe de mantener en rangos fisiológicos [normales]
¿Qué pasa en las soluciones hipertónicas?
Encogimiento celular
El edema celular sucede en…
Soluciones hipotónicas
El tamaño de la muestra debe de ser:
<0.5cm3 → grosor suficiente para que el fijador pueda entrar
El volumen debe de ser…
15 veces el volumen de la muestra
Las temperatura debe de ser…
Ambiente
¿De cuánto es la duración?
1 hora / 1mm de tejido
normalmente nos llevamos 5 horas de fijación
Prepara el tejido para corte
Inclusión
¿En qué consiste el tren alcohol-xilol-parafina
- alcohol = deshidratación
- Xilol = aclarado (se saca el alcohol y se reemplaza con xilol)
- parafina = reemplaza las moléculas de xilol
VERDADERO O FALSO: el alcohol es miscible en parafina
Falso
¿Qué se usa para cortar las muestras?
Microtomo
Las laminillas ¿cuánto tienen de grosor?
5-15 μm
¿A cuántos grados se derrite la cera?
64°C
¿Qué es la coloración?
Proceso mediante el cual un cuerpo es teñido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado para preparar la solución de tinción
Sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos
Colorantes
Componentes de los colorantes
- Esqueleto incoloro
- Cromóforo
- Auxocrómo
Propiedad de los colorantes que posee un anillo aromático de benceno
Esqueleto incoloro
Propiedad de los colorantes que aporta el ,,color”
Cromóforo
Propiedad de los colorantes que es lo que hace que se una a elementos del tejido
Auxocrómo
COMPLETA:
La mayoría de los colorantes usados en histología se comportan como _______ o ________ y tienden a formar ______________________________________________________
Ácidos; bases
sales con los radicales ionizables presentes en los tejidos
Colorante presente en el citoplasma
Eosina
Colorante presente en el núcleo
Hematoxilina
¿Con qué reaccionan los colorantes básicos?
Con los componentes aniónicos (tienen carga negativa)
[esto es porque las bases tienen carga positiva, entonces se unen a componentes con carga negativa]
Ejemplo de componentes aniónicos y rxn con colorantes básicos
Grupos fosfato de los ácidos nucléicos, grupos sulfato de los glucosaminoglucanos
¿Con qué reaccionan los colorantes ácidos?
Con los componentes catiónicos de las células (son positivos)
Pierde electrones, tiene carga positiva
Catión
Gana electrones, tiene carga negativa
Anión
¿Qué es acidófilo?
Afín al colorante ácido
¿Qué es basófilo?
Afín al colorante básico
¿Qué estructuras son acidófilas?
- citoplasma
- Pared celular
- Colágeno
- Tejido conjuntivo
- Estructuras que rodean y sostienen a la célula
¿Qué estructuras son basófilas?
- ribosomas
- Cromatina
- Material genético dentro del núcleo
¿De dónde se extrae la hematoxilina?
Haematoxylum campechianum.
VERDADERO O FALSO: la hematoxilina es estrictamente un colorante básico
Falso, se usa con un mordiente (intermediario) no se une por enlace electrostático
La hematoxilina es ideal cuando…
Le siguen tinciones acuosas ácidas
¿Cómo se produce la eosina?
Mediante una rxn entre la bromina y la fluoreceina
Variantes de la eosina
- Eosina Y (amarillenta)
- Eosina B (azul)
Variante de eosina más usada
Eosina Y
VERDADERO O FALSO: alcohol y agua son miscibles entre ellos
Verdadero
¿De qué color pinta hematoxilina?
Morado, es base
¿De qué color pinta eosina?
Rosa, es ácida
¿De qué color son: núcleos, citoplasma, colágena I, rRNA con H&E?
- Núcleos = morado
- Citoplasma = rosa
- Colágena I = rosa
- rRNA = morado
Otras tinciones aparte de H&E
- tricrómico de Masson
- PAS
- Carmín de Best
- Feulgen
- Azul de toluidina
- Argentafines y argilófilas
Con tricrómico de Masson de qué color se ven: núcleos, músculo, colágena, citoplasma
- núcleos = café
- Músculo = rojo
- Colágena = azul
- Citoplasma = rojo
¿Qué tiñe PAS?
Carbohidratos y biomoléculas ricas en carbohidratos
¿De qué color tiñe PAS?
Magenta
Estructuras que son ricas en carbohidratos
- glucógeno
- Moco
- Membrana basal subyacente a epitelios
- Fibras reticulares
Carmín de Best tiñe principalmente…
Zonas ricas en glucógeno
Con carmín de best, de qué color se ven los núcleos y el glucógeno
- núcleos = azul
- Glucógeno = rojo
¿Para qué sirve la tinción de Feulgen?
Ver ácidos nucléicos
¿De qué color se ven los ácidos nucléicos y el fondo en la tinción de Feulgen?
- Ácidos nucléicos = magenta
- Fondo = verde
¿De qué color se tiñen las estructuras con azul de toluidina? (Núcleo, citoplasma, eritrocitos, colágeno, gránulos mastocitos)
- Ńúcleo = azul
- Citoplasma = azul
- Eritrocitos = azul
- Colágena = azul
- Gránulos mastocitos = púrpura
Metacrosoma…
Cambio de color en zonas de tejidos con presencia de polianiones (se terminan viendo de otro color)
Estas tinciones dependen de la presencia en el tejido de grupos fenólicos (catecolaminas o indolaminas) que reducen las sales de plata (u otros metales)
Argentafines
En estas tinciones se añade un agente reductor como la hidroquinona o la formalina
Argilófilas
Tanto las argentafines como las argilófilas se usan para:
- células neuroendrocrinas
- Fibras de reticulina
- Melanina
¿Dónde están las fibras elásticas?
Tejido conectivo
Tinciones para ver fibras elásticas
- Verhoeff
- Reyes
- Orceína
- Fuscina resorcina
Ejemplo de tinción especializada del estudio tisular
Inmunohistoquímica
¿Qué es un antígeno?
Molécula que puede ser reconocida por el sistema inmune
Mayormente son proteínas
¿Qué es la inmunohistoquímica?
Reacción de un antígeno con un anticuerpo
Método directo de inmunohistoquímica
Se marca el anticuerpo específico. Donde se pega el anticuerpo se colorea
Método indirecto inmunohistoquímica
Se marca un anticuerpo común contra un epítopo común del anticuerpo específico
¿Qué es PCNA en inmunohistoquímica?
Es cuando se pueden observar a las células en proliferación
¿Qué es la hibridación in situ?
Cuando buscamos un gen
