Technologies de l'ADN - Enzymes de restriction

Question 1

Qu’est-ce qu’une nucléase

Answer 1

Enzyme qui clive les liaisons phosphodiester entre deux nucléotides

Question 2

Quelle est la différence entre une exonucléase et une endonucléase

Answer 2

Exonucléase : coupe à partir d’une extrémité

Endonucléase : Coupe au milieu de la chaine et produisent des fragments

Question 3

Qu’est-ce qu’une endonucléase de restriction

Answer 3

Enzyme qui coupe dans des endroits caractérisés par une séquence de nucléotides spécifique (site de restriction)

Question 4

Pourquoi les bactéries ont des enzymes de restriction

Answer 4

Servent à la défense contre les virus des bactéries en coupant l’ADN étranger en morceaux

Question 5

La majorité des enzymes de restriction reconnaissent quel type de séquence

Answer 5

Séquences palindromiques

Question 6

Quels sont les types de bouts que les enzymes de restriction peuvent donner

Answer 6

Bouts francs

Bouts collants

Question 7

Comment peuvent-on séparer les fragments d’ADN

Answer 7

Par leur taille avec électrophorèse sur Gel d’Agarose

Question 8

Les fragments vont vers quel pôle sur le gel

Answer 8

Pole positif

Question 9

Les fragments plus petits sont plus proche ou plus loin du puit d’origine

Answer 9

Plus long

Question 10

Comment peuvent-on détecter les fragments d’ADN sur un gel d’agarose

Answer 10

En ajoutant une molécule fluorescente qui va entre la double hélice

Question 11

Quelle est la condition pour que deux fragments couper par une enzyme se rejoinent par ligation

Answer 11

Elles doivent être couper par la même enzyme

Question 12

Quel type de bouts est plus efficace lors de la ligation

Answer 12

Bout collant - appariement de base

*bout franc dépend des collisions aléatoires

Question 13

Qu’est-ce qu’un plasmide

Answer 13

Cercle d’ADN qui peut se répliquer de façon autonome dans organisme hôte
*avec origine de réplication

Question 14

Qu’est-ce qu’un vecteur

Answer 14

Plasmide contenant des séquences :

1. Origine de réplication
2. Résistance à antibiotiques
3. Site de multiclonage

Question 15

Qu’est-ce que le clonage

Answer 15

Insertion d’un fragment d’ADN dans un vecteur

Question 16

Comment l’insertion du fragment d’ADN dans le vecteur s’effectue

Answer 16

Coupage de l’ADN et plasmide avec enzyme de restriction

Question 17

Nomme quelques utilisations possibles de l’ADN cloné

Answer 17

Préparer une grande quantité afin de séquencer l’ADN
Poursuivre un autre clonage avec ce plasmide
Production de protéines recombinantes

Question 18

Qu’est-ce que la transformation

Answer 18

Procédé d’introduction d’un plasmide dans une souche de bactérie / levure

Question 19

Comment on identifie les cellules qui ont reçu le plasmide

Answer 19

Utilise un marqueur de sélection qui code pour la résistance à un antibiotique

Question 20

Quelle est la caractéristique la plus saillante des enzymes de restriction

Answer 20

Coupent des séquences palindromiques

Question 21

Peut-on liguer un fragment d’ADN ayant des bouts collants avec un autre fragments d’ADN ayant des bouts francs

Answer 21

Oui

Le bout collant se rempli à l’aide de l’ADN polymérase

Question 22

Quels sont les éléments importants d’un vecteur général de clonage et, en particulier d’un vecteur d’expression

Answer 22

1. Origine de réplication
2. Résistance à antibiotiques
3. Site de multiclonage