Synthèse chimique de l’ADN Flashcards
Quel est le nom de la méthode et quel est le fonctionnement général?
Phosphoramidite
Automatisé, fait par une machine
1 brin à la fois
Synthétise à partir de 3’
Étape 0
Préparation de la colonne se synthèse, il y a une matrice associée au premier nucléotide par un lien ester.
Le nucléotide a un groupement DMT et benzoyl d’accroché en 5’ avec une base azotée.
Étape 1
Détrylation (lavage avec un acide faible) qui coupe le DMT en laissant le groupement hydroxyle en séchage à l’argon
Étape 2
Activation du prochain nucléotide en ajoutant un cycle de tetrazole sur le groupement protecteur en 5’
Étape 3
Ajout du nucléotide activé sur nucléotide précédent par un groupement phosphite instable (plutôt que le lien phosphate normal)
Étape 4
Blocage des nucléotides qui n’ont pas réagit par acétylation en 5’
Étape 5
Oxydation du groupement phosphite en phosphate (rajout =O)
Étape 6
Détritylation de la 2e base par acide faible