Suite Cours 3 Flashcards
Quels sont les avantages (5) d’un détecteur fluorométrique pour la HPLC?
- sensible que UV-Vis
- Très spécifique
- Peu sensible à T ou débit de la phase mobile
- Utilisable en mode gradient
- Non destructif
Quels sont les inconvénients (5) d’un détecteur fluorométrique pour la HPLC?
- Composés doivent être fluorescents
- Phase mobile: > 10% solvant organique (rendement quantique + important dans organique)
- Dérivatisation si pas fluo.
- Optimisation des λéx et λém
- Sensible à O2 dissout (effet de quenching = extinction de l’émission fluorescente)
Quelles sont les 4 étapes de la chromatographie d’affinité?
- Ajout d’échantillons (molécules de connaissance)
- Adsorption
- Laver les impuretés
- Élution (en changeant la phase mobile)
VRAI OU FAUX:
La chromatographie d’affinité est - analytique et + préparatif pour la purification.
Vrai
Comment faire éluer le soluté (biomolécule) de façon non spécifique (2)?
- Changer la force ionique et la polarité de l’éluant
2. Variation de pH (pour favoriser 1 rx)
Comment faire éluer le soluté (biomolécule) de façon spécifique (2)?
- Avec soluté compétitif (bloque sites)
2. Avec ligand compétitif
Quelles sont les 4 méthodes d’élution dans une chromatographie d’affinité?
- Changer le tampon; force ionique ou polarité de l’éluant (meilleure)
- pH extrêmes ou [chaotropes] élevée (change forme ligand ou analyte)
- Ajout ligand compétitif
- Ajout soluté compétitif
En ce qui concerne la chromatographie d’affinité, on peut faire la purification à l’aide de quelle protéine?
6 x His-Tag
Sur quel principe de séparation se base ceci: compétition entre les ions dans la phase mobile et le soluté ionique injecté pour les sites chargés de la phase stationnaire?
Échange d’ions
VRAI OU FAUX:
La résine échangeuse d’anions a phase stat. chargée -.
Faux, chargé + pour les anions
VRAI OU FAUX:
La résine échangeuse de cations a phase stat. chargée -.
Vrai (pour les cations)
VRAI OU FAUX:
En ce qui concerne la chromatographie d’affinité (échange d’ions), l’élution par gradient est utilisé lorsqu’on commence avec un échantillon inconnu.
Vrai
En ce qui concerne la chromatographie d’affinité (échange d’ions), quand est-ce que l’élution par plateau est utilisé?
Lorsque l’on veut accélérer le temps de séparation et réduire la consommation du tampon
VRAI OU FAUX:
Lors de chromatographie d’affinité par échange d’ions seulement des interactions électrostatiques ont lieu.
Faux, aussi Van Der Waals ou non polaire
Quel type de chromatographie (séparation) est basée sur la taille des molécules et, donc, de leur aptitude à pénétrer dans le réseau de pores?
Exclusion stérique (SEC)
