Secuenciacion Del ADN Flashcards
Estructura de los anticuerpos
2 cadenas pesadas + 2 cadenas ligeras
Región variable (cambia para cualquier proteina)
Región constante (mantiene 1 estructura similar en los anticuerpos
Tipos de anticuerpos
Monoclonales: 1 sola línea celular, reconoce solo 1
Policlonales: producido por múltiples líneas celulares, reconocen a varios
Tipos de ELISA
Directo, indirecto (2Ac), sandwich
Función de la ELISA directa
Usa 1 Ac primario marcado por 1 enzima
Función de la ELISA indirecto
Usa 1 Ac primario sin marcar y 1 secundario marcado con enzima
Función de la ELISA sandwich
2 Ac que atrapan al Ag
Ac - Ag - Ac
Pasos de ELISA directo
Ag inmovilizado sobre 1 placa
Se agrega 1 Ac primario marcado con 1 enzima que se unirá al antígeno de interés
El Ac viene pegado con 1 enzima y al momento de ponerle el sustrato la enzima emite 1 color
depende del sustrato que se utilice, el color que va a tener
Pasos de ELISA indirecto
Inmovilización del antígeno en la placa.
Adición del anticuerpo primario.
Adición del anticuerpo secundario marcado con enzima.
Adición del sustrato: Cambio de color indica la presencia del antígeno.
Pasos de ELISa sandwich
Inmovilización de Ac sobre 1 placa
Se añade la muestra con el Ag de interés
Se pone un segundo Ac
Ac - Ag - Ac
Se usan 2 Ac diferentes monoclonales para reconocer al mismo Ag
Se añade sustrato y se proporciona 1 señal base
Detecta y/o cuantifica el Ag
Que es la citometria de flujo
Identifica, cuantifica y clasifica células en 1 muestra
Para que nos sirve la citometria de flujo
Nos ayuda a distinguir el tipo de células del paciente, la enfermedad y si el tratamiento esta teniendo efecto o no
Que identifican los Ac monoclonales en citometria de flujo
Identifica prote de membrana o dentro de la célula
Proceso de la citología de flujo
Preparación de células (sangre, suero, etc.).
una vez liquidas se lavan las células.
Permeabilización de células para permitir la entrada de anticuerpos.
Marcación con anticuerpos monoclonales unidos a fluorocromos.
Análisis en el citómetro: Detecta fluorescencia y grafica los resultados. Pasan en fila india, uno por uno para graficar para saber que célula tiene los Ac y cuantas en total
puede ver el tamaño de cada célula y su complejidad
Función de los marcadores de membrana (CD)
Identifican los tipos celulares
Objetivos de la southern BLOT
Detecta 1 secuencia de ADN -> sirve para diagnosticar
Cuánto se tarda la southern BLOT
1 día es el mas tardado
Objetivo de la northern BLOT
Detecta 1 secuencia especifica del ARN en sangre o tejido -> para estudios de expresión genica
Objetivo de la western BLOT
Detecta 1 proteína especifica en sangre o tejido, identifica Ag -> diagnostica enfermedades
Para que sirven los microarreglos
Permite analizar la expresión de miles de genes simultáneamente (hasta 200 genes es 1 chip) ES MUY COSTOSO
Que estrategias puede observar las proteínas circulantes
Weestern y Elisa
Que observa la prueba western
Proteinas circulantes
Enfoque cualitativo y tamaño
Que observan las pruebas ELISA
Proteínas circulantes
Enfoque cuantitativo
Que prueba observa a las proteínas en la célula
La citometria de flujo
Que puede observar la citometria de flujo
Las proteínas en células
Observa el tamaño y que proteína es
