Analisis De Acidos Nucleicos Flashcards
De donde se puede obtener el ADN
Sangre, orina, cabello, salida, unas, piel, heces
De que elemento no se puede extraer ADN
Eritrocitos (no tienen núcleo)
Pasos de la técnica de extracción fenol cloroformo
Lisis celular -> desnaturalización de proteínas -> extracción de proteínas y lípidos -> precicipacion de ADN (etanol al 100%) -> lavado de ADN (etanol al 60%)
Objetivo de la espectrofotometria
Determina la pureza y concentración del ADN
Longitudes de onda en la espectrofotometria y función
- 260nm -> absorben el ADN
- 280 nm-> absorben a prote
Qué significa un valor mayor a 1.8 en espectrofotometria
ADN puro
Qué significa un valor menor a 1.8 en espectrofotometria
Contaminación de proteínas
Componentes necesarios para la PCR
ADN molde, primers, nucleotidos, ADN polimerasa, buffer (mantiene pH adecuado), cofactores (Mg activa a la polimerasa)
Pasos de la PCR
Desnaturalización (95ºC) (20-30seg)
Hibridacion (50-60ºC) + primers
Extensión (72ºC)(Taq polimerasa sintetiza a la nueva cadena)
De 35-45 ciclos
Fórmula de la hibridacion
Tm=(4×(G+C))+(2×(A+T))
Objetivo de la electroforesis
Separa fragmentos de ADN por tamaño y carga
Los ácidos nucleotidos hacia que polo migra en la electroforesis
Al polo +
Función PCR estándar
Indica presencia / ausencia de 1 secuencia
Función de PCR múltiple
Amplificador de varios genes / secuencias simultáneamente
Función de la PCR-RFLP
Detecta polimorifsmos con las encimas de restricción
Función de la RT-PCR
Sintetiza ADN a partir de ARN
Función de la PCR en tiempo real (qPCR)
Cuantifica cantidad de ADN / ARN en 1 muestra
Colorantes en la qPCR
Específico: TaqMan
Inespecífico: YBR green
