ADN Recombinante Flashcards
Que es el ADN recombinante
Combinación de fragmentos de ADN de diferentes orígenes
Pasos del ADN recombinante
Localizar el gen de interés en la célula donadora.
Cortar el gen con enzimas de restricción.
Insertar el gen en un vector (plásmido, virus, etc.).
Introducir el ADN recombinante en una célula huésped (ej. bacteria).
Confirmar la expresión del gen insertado.
Clonar el gen para obtener múltiples copias
Elementos de las bacterias
1 ADN cromosómico
1 ADN plasmido (si los quitas no pasa nada)
Que son las enzimas de restricción
Endonucleasas
V/F cada bacteria tiene su propia e. De restricción
Verdadero
Origen de las enzimas de restricción
Provienen de bacterias
Función de las enzimas de restricción
Corta el ADN invasor y lo metían para proteger el ADN bacteriano
Tipo I de enzimas de restricción
Es asimétrico
El sitio de corte es aleatorio
Corta muy lejos
Tipo II de enzimas de restricción
Hay secuencias palindromicas y ahí realiza el corte
Tipo III de enzimas de restricción
Es asimétrico, reconoce una secuencia especifica
Tipo IV de enzimas de restricción
Reconoce el ADN metilado
Cuáles son los 2 tipos de cortes
Cohesivo y ROMO
Como es el corte cohesivo
Ideal para unir fragmentos
Deja libres entre 3-5 nt
Debemos cortar con las mismas e. De restricción para tener los mismos nt libres
Como es el tipo de corte ROMO
Era un corte limpio
Menos eficiente para ligación
No sobran nt
Que son los vectores de clonación
Moléculas de ADN que transportan el gen de interés a la célula huésped
Que deben tener los vectores de clonación
Debe tener 1 punto ORI + sitio múltiple de clonación (muchas secuencias palandromicas para poder cortar y luego insertar el gen que se busca) + marcador de selección
Usos de los vectores
Clonación y expresión
Como se corta el gen
Con enzimas de restricción
Con que se unen los fragmentos y que se forma
Con ADN ligasa y forma ADN recombinante circular
Como son los plasmidos
Circulares y de doble cadena
Muy pequeños
Ventajas de los plasmidos
Fáciles de manipular, replicación rápida
Sirve para clonación y expresión. .
Características de los bacteriofafos
ADN circular
Ventajas de los bacteriofagos
Mayor capacidad que plásmidos.
Nos permite meter fragmentos de DNA mas grandes
Se le quita el material genético para que únicamente exprese nuestro DNA.
Para expresión o clonación
Ventajas de los cósmicos
Combina plásmido + bacteriófago.
Alberga pedazos muy grandes y transporta genes.
Para clonación
