Séance H

Question 1

Décrire la technique d’immunobuvardage de type Western Blot

Answer 1

Technique analytique semi quantitative qui permet d’identifier une protéine spécifique sur
un gel d’électrophorèse

Question 2

Étapes d’immunobuvardage

Answer 2

1. Électrophorèse
2. Transfert des protéines du gel électrophorétique vers une membrane appropriée
3. Blocage
4. Adsorption d’anticorps (primaire, secondaire) et lavages
5. Détection

Question 3

Décrire de manière générale l’étape de transfert

Answer 3

La champ éléctrique traverse le “sandwich” perpendiculairement

Question 4

2 types de membranes

Answer 4

Nitrocellulose : haute affinité et bonne rétention des protéines, mais fragile lors
d’ immunobuvardages répétés

PVDF ( polyvinylidene difluorure )): meilleure résistance mécanique permettant leur
utilisation lors d’ immunobuvardages répétés, cependant, bruit de fond est plus élevé

Question 5

Le type de tampon utilisé lors du transfert est en général dicté par le type __________

Answer 5

d’électrophorèse utilisé

Question 6

Importance du Blocage?

Answer 6

Étape importante pour éviter une adsorption non spécifique des anticorps sur la membrane

Question 7

Le lavage a lieux quand?

Answer 7

Après le blocage, l’agout de l’anticorps primaire et secondaire

Question 8

Le tampon standard utilisé pour le lavage est le :

Answer 8

PBS ou TBS

Question 9

Méthodes de détections possibles

Answer 9

Anticorps marqué radioacivement

Anticorps conjugués à une enzyme

Colorimétrique

Chemiluminescente

Chemifluorescente