Scéance F Flashcards
Ces quoi l’éléctrophorèse?
Déplacement de molécules chargées dans un champ électrique
La vitesse de migration des protéines sur une gel d’éléctrophorèse peut dépendre de quoi? Nomme 3
Intensité du champ électrique
Taille / poids moléculaire / forme
Charge portée par la molécule
pH du milieu
Température
Durée
Taille des pores du gel / concentration en acrylamide
Quelle est le principe de l’éléctrophorèse?
Quelle est sont équation de vitesse de migration?
Principe : Tout ion ou molécule chargée lorsque placée dans un champ électrique migrera à une vitesse dépendante de :
- Charge nette
- Taille/Forme
- Champ éléctrique appliquer
Équation : V = (E x q)/f
V = Velocité de la molécule
E = force du champ éléctrique
q = Charge net de la molécule
f = coéfficient de friction
Nommes les différents types d’éléctrophorèses. (6)
SDS-PAGE
PAGE non dénaturant
Focalisation isoéléctrique
Électrophorèse en 2D
Zymogrammes pour enzymes de type MMP
Éléctrophorèse capillaire
Quelles sont les différents types de supports utilisé en éléctrophorèse?
Papier :
- Papier filtre
- Acétate de cellulose
Gel :
- Amidon
- Agarose
- Polyacrylamine
Nommes les différents composés entrant dans la formation d’un gel de polyacrylamide (7)
Acrylamide
Bisacrylamide (agent de réticulation)
Tampon de tris-HCl (pour stabiliser le pH)
SDS (optionnel, pour gels dénaturants)
Persulfate d’ammonium (APS) (initiateur de polymérisation)
TEMED (catalyseur de la polymérisation)
Eau distillée
Explique les paramètres %T et %C
%T : pourcentage total de la concentration en g des monomères (acrylamide + bisacrylamide ) par
100 mL et, en général, la taille des pores est inverse au %T
%C : pourcentage en poids de l’agent réticulant bisacrylamide par rapport à la quantité totale de
monomères
Quelle est la différence entre les électrophorèses SDS-PAGE et PAGE natif
SDS : Séparation est basé sur le poids moléculaire, on va utiliser des agents dénaturant et on fait ceci pour vérifier la pureté d’une protéine
Page Native : Séparation est basé sur la charge et la forme, il n’y à pas d’utilisation d’agent dénaturant et on peut récupérer la protéine et la réutiliser
Gels continus et gels discontinus
Gels continus :
- Tampon unique
- Concentration en acrylamide constante dans le gel
Gels discontinus :
- Tampons différents
- Présence d’un gradiant de concentration d’acrylamine dans le gel
Ces quoi le système Laemmli?
Ces un système PAGE discontinu qui comprend :
- Tampons différents
- 2 gels (entassement/ stacking et résolution/séparation) dont les concentrations en acrylamide sont différentes
