Séance 2 : Immunoprécipitation et structure des immunoglobulines

Question 1

Décrire l’immunoprécipitation.

Answer 1

Permet d’aller chercher par liaison Ac-Ag une protéine ou un peptide en particulier dans un mélange complexe de protéines

Question 2

Comment se fait la précipitation du complexe Ag-Ac?

Answer 2

À l’aide de billes recouvertes de protéines qui ont une grande affinité pour les immunoglobulines : permet de les imobiliser sur les billes

Question 3

Comment sépare-t-on ensuite le complexe Ag-Ac du mélange de protéines?

Answer 3

On retire les billes par centrifugation ou magnétisme : complexe Ag-Ac fixé sur les billes donc en enlevant le surnageant après la centrifugation ou le magnétisme, on enlève le mélange de protéines sans enlever la protéine spécifique qu’on veut

Question 4

Quelles sont les protéines d’immobilisation possibles à mettre sur les billes?

Answer 4

Protéine A de Staphylococcus aureus
Protéine G de Streptococcus sp.
Ac anti-immunoglobulines

Question 5

Quelles protéines d’immobilisation, antisérum et mélange de protéines ont été utilisés pour l’expérience dans le laboratoire?

Answer 5

Protéine A
Antisérum de lapin anti-pyruvate kinase
Mélange de protéines extraites de muscle de poulet

Question 6

Que contient le témoin Ag seul?

Answer 6

200 ul d’extrait brut de muscle de poulet

10 ul de billes

Question 7

Que contient le témoin Ac seul?

Answer 7

5 ul d’Antisérum anti-PK
200 ul de tampon Tris
10 ul de billes

Question 8

Que permet l’électrophorèse en gel de polyacrylamide-SDS (SDS-PAGE)?

Answer 8

Permet de séparer les différentes protéines d’un échantillon

Question 9

Comment dénature-t-on les échantillons avant de les déposer sur gel?

Answer 9

Chauffage à 95C en présence de détergent (SDS) et un agent réducteur des ponts disulfures (b-mercaptoéthanol)

Question 10

Que permet le b-mercaptoéthanol?

Answer 10

Dissocier les sous-unités

Question 11

Que permet le SDS?

Answer 11

Se lie aux sous-unités protéiques réduites en qté environ proportionnelle au poids moléculaire : donne une charge négative nette importante (rend la charge intrinsèque de la protéine insignifiante)
Protéines chargées négativement se séparent selon leur poids moléculaire

Question 12

Vers quelle électrode migrent les protéines après le traitement?

Answer 12

Électrode chargée positivement

Question 13

À quoi est inversement proportionnelle la vitesse de migration des polypeptides à travers le gel poreux de polyacrylamide?

Answer 13

Taille du polypeptide

Question 14

Quel colorant a été utilisé dans le protocole réalisé en laboratoire pour visualiser les protéines dans le gel?

Answer 14

Colorant de type «trihalo»

Question 15

Avec quoi réagit le colorant de type «trihalo»?

Answer 15

AA tryptophane

Question 16

Comment le colorant permet-il de détecter les protéines dans le gel (à part du fait qu’il réagit avec les aa tryptophane?)?

Answer 16

Activé par les UV : permet de détecter les protéines dans le gel

Question 17

Que permet le traitement à la chaleur (préparation des échantillons au SDS-PAGE)?

Answer 17

Dénaturer les protéines et assurer une liaison optimale du SDS

Question 18

Quand faut-il arrêter le gel????

Answer 18

Quand le bleu de bromophénol atteint la fin du gel!!!!!!!! (pas comme on a fait lol) (en plus j’avais surligné «fin du gel» dans mon cahier sad Josianne noises)

Question 19

De combien de chaînes polypeptidiques sont composés les Ac?

Answer 19

4 : 2 lourdes, et 2 légères

Question 20

Entre quels poids moléculaires varient les chaînes lourdes?

Answer 20

entre 53 et 75 kDa

Question 21

Quel facteur fait varier le poids moléculaire des chaînes lourdes?

Answer 21

Le type d’Ig : IgG, IgM, IgD, IgA ou IgE

Question 22

Quel est le poids moléculaire des chaînes légères?

Answer 22

Environ 25 kDa

Question 23

Entre quels poids moléculaires varient le poids total des Ig?

Answer 23

Entre 150 et 970 kDa

Question 24

Comment les chaînes lourdes et légères sont-elles maintenues ensemble?

Answer 24

Par des liaisons covalentes des ponts disulfures

Question 25

Qu’est-ce qui diffère entre les isotypes d’Ig (IgG, IgM, IgD, IgA ou IgE)?

Answer 25

Le nombre et le positionnement des ponts disulfures entre les chaînes, le nombre d’oligosaccharides attachés aux chaînes lourdes et la taille des chaînes lourdes

Question 26

Sous quelle forme sont retrouvés les IgG?

Answer 26

Monomères

Question 27

Sous quelle forme sont retrouvés les IgM?

Answer 27

Pentamères

Question 28

Combien de sites de liaison à l’Ag les IgM offrent-ils?

Answer 28

10

Question 29

Comment ont été mises en évidence les différences entre les IgG et les IgM dans le protocole réalisé en labo?

Answer 29

Par séparation sur gel de polyacrylamide en conditions natives et en conditions dénaturantes