Séance 1 : immunodiffusion et hémagglutination

Question 1

Comment l’immunodiffusion facilite-t-elle l’analyse des interactions entre Ag et Ac?

Answer 1

Sépare les réactifs dans un gel d’agarose : Ag et Ac ne diffusent pas à la même vitesse dans le gel –> crée un gradient de concentration des Ag et Ac qui migrent en sens opposés : gradient permet d’obtenir le «point d’équivalence»

Question 2

Qu’est-ce que le point d’équivalence?

Answer 2

Zone dans le gel où Ag et Ac sont dans des proportions optimales pour se lier et former un réseau : complexes immuns regroupés en réseau deviennent insolubles et précipitent dans le gel –> observation d’une «ligne de précipitation» pour chaque système Ag-Ac

Question 3

Qu’est-ce que la ligne de précipitation dans l’immunodiffusion double d’Ouchterlony?

Answer 3

Précipitation des complexes immuns regroupés en réseau qui deviennent insolubles dans le gel

Question 4

Décrire à quoi ressemble une plaque d’Ouchterlony et où sont déposés les sérums et antisérums.

Answer 4

Un puits central et plusieurs puits satellites équidistants du puits central
Antisérum : puits central
Sérum : puits satellites

Question 5

Qu’indique le profil des lignes de précipitation?

Answer 5

Si des Ag sont partagés entre les différents sérums et permet aussi de déterminer le titre d’un antisérum

Question 6

Qu’est-ce que le titre?

Answer 6

Inverse de la dilution ultime de l’Ac permettant d’observer une ligne de précipitation dans le gel

Question 7

Avec quel colorant colore-t-on une plaque d’Ouchterlony?

Answer 7

Trypan bleu

Question 8

Dans quoi dilue-t-on les Ag et Ac (si besoin) avant de les mettre dans les puits?

Answer 8

PBS

Question 9

Quelles informations doit-on noter lorsqu’on observe les lignes de précipitation?

Answer 9

Forme, intensité et distance relative aux puits

Question 10

Quels sont les 3 profils de précipitation possibles lorsqu’on compare 2 Ag pour le même antisérum?

Answer 10

Identité
Non-identité
Identité partielle

Question 11

Que signifie une identité et à quoi ressemble la ligne de précipitation dans un tel cas?

Answer 11

Épitopes identiques dans les deux préparations

Lignes de précipitations des 2 Ag fusionnent

Question 12

Que signifie une non-identité et à quoi ressemble la ligne de précipitation dans un tel cas?

Answer 12

Aucun épitope en commun

Lignes de précipitation se croisent

Question 13

Que signifie une identité partielle et à quoi ressemble la ligne de précipitation dans un tel cas?

Answer 13

Un épitope est commun aux deux préparations d’Ag, mais un autre épitope reconnu est uniquement présent sur un des deux Ag
Éperon formé

Question 14

Qu’est-ce qu’un Ag particulaire?

Answer 14

Bactérie, globule rouge ou autre cellule possédant des Ag à sa surface
ou
Billes synthétiques sur lesquelles on a fixé des Ag

Question 15

Qu’est-ce qu’une réaction d’agglutination?

Answer 15

Formation de petits agrégats constitués d’un réseau de complexes immuns lorsqu’on met en contact des Ag de type particulaire à leur anticorps spécifique

Question 16

Qu’est-ce que l’hémagglutination directe?

Answer 16

Met en évidence des Ag naturellement présents à la surface des globules rouges ou hématies

Question 17

Dans quel but utilise-t-on fréquemment l’hémagglutination directe?

Answer 17

Identification du groupe sanguin (présence ou absence de certains Ag de surface sur les globules rouges)

Question 18

Que permet l’hémagglutination indirecte?

Answer 18

Permet de mettre en évidence la présence d’Ag fixés artificiellement à la surface des globules rouges

Question 19

De quelle façon des globules rouges pourraient-ils adsorber des protéines?

Answer 19

Traiter les globules rouges à l’acide tannique

Question 20

Décrire l’hémagglutination.

Answer 20

Observée après sédimentation des globules rouges au fond d’un tube
Globules rouges forment un large disque au fond du tube
Si non agglutinés : se déposent en un petit point dense

Question 21

Comment détermine-t-on la concentration optimale d’acide tannique à utiliser pour traiter les globules rouges (décrire de façon générale)?

Answer 21

Faire des dilutions croissantes d’acide tannique et ajouter les globules rouges : incuber puis centrifuger et observer l’agglutination au fond des tubes : La plus forte concentration en acide tannique qui ne montre aucune agglutination des globules rouges est la concentration optimale pour traiter les globules rouges

Question 22

Dans quelle solution doit-on faire les dilutions d’acide tannique?

Answer 22

PBS 1X

Question 23

Décrire globalement les étapes du traitement des globules rouges de mouton.

Answer 23

Transférer les globules rouges dans un tube conique, ajouter l’acide tannique (même volume que les globules rouges), mélanger délicatement et incuber : laver les cellules dans du PBS 1X (centrifuger, enlever surnageant, ajouter PBS, remettre en suspension, centrifuger et enlever surnageant, ajouter PBS pour amener au volume initial)

Question 24

Peut-on laisser des globules rouges traités à l’acide tannique au frigo par exemple pour les utiliser plus tard?

Answer 24

Non, ils doivent être utilisés immédiatement (comme les maudites cellules compétentes mausus sinon tu scrap ta transfo 5 fois)

Question 25

Décrire globalement les étapes du couplage de l’Ag aux globules rouges de mouton.

Answer 25

Dans un tube conique mélanger : globules rouges traités à acide tannique, saline tamponnée et Ag : incuber, centrifuger, laver 2 fois, remettre les globules rouges en suspension dans du PBS 1X contenant du sérum de lapin pour retrouver le volume initial

Question 26

Quel Ag est couplé aux globules rouges dans le protocole des notes de cours?

Answer 26

BSA albumine bovine

Question 27

Le complément est-il actif dans l’antisérum?

Answer 27

Non, il a été inactivé par une incubation (30 min à 56 degrés)

Question 28

Pourquoi le complément doit-il être inactivé dans l’antisérum?

Answer 28

Pour empêcher la lyse des globules rouges par celui-ci

Question 29

Dans quelle solution doit-on diluer l’antisérum anti-BSA?

Answer 29

PBS 1X

Question 30

Que représente un résultat positif? (Qu’est-ce qu’on observe qui nous permet de dire que le résultat est positif?)

Answer 30

Agglutination des globules rouges : formation d’un réseau et donc la réaction couvre tout le puits