Séance 1 : immunodiffusion et hémagglutination Flashcards
Comment l’immunodiffusion facilite-t-elle l’analyse des interactions entre Ag et Ac?
Sépare les réactifs dans un gel d’agarose : Ag et Ac ne diffusent pas à la même vitesse dans le gel –> crée un gradient de concentration des Ag et Ac qui migrent en sens opposés : gradient permet d’obtenir le «point d’équivalence»
Qu’est-ce que le point d’équivalence?
Zone dans le gel où Ag et Ac sont dans des proportions optimales pour se lier et former un réseau : complexes immuns regroupés en réseau deviennent insolubles et précipitent dans le gel –> observation d’une «ligne de précipitation» pour chaque système Ag-Ac
Qu’est-ce que la ligne de précipitation dans l’immunodiffusion double d’Ouchterlony?
Précipitation des complexes immuns regroupés en réseau qui deviennent insolubles dans le gel
Décrire à quoi ressemble une plaque d’Ouchterlony et où sont déposés les sérums et antisérums.
Un puits central et plusieurs puits satellites équidistants du puits central
Antisérum : puits central
Sérum : puits satellites
Qu’indique le profil des lignes de précipitation?
Si des Ag sont partagés entre les différents sérums et permet aussi de déterminer le titre d’un antisérum
Qu’est-ce que le titre?
Inverse de la dilution ultime de l’Ac permettant d’observer une ligne de précipitation dans le gel
Avec quel colorant colore-t-on une plaque d’Ouchterlony?
Trypan bleu
Dans quoi dilue-t-on les Ag et Ac (si besoin) avant de les mettre dans les puits?
PBS
Quelles informations doit-on noter lorsqu’on observe les lignes de précipitation?
Forme, intensité et distance relative aux puits
Quels sont les 3 profils de précipitation possibles lorsqu’on compare 2 Ag pour le même antisérum?
Identité
Non-identité
Identité partielle
Que signifie une identité et à quoi ressemble la ligne de précipitation dans un tel cas?
Épitopes identiques dans les deux préparations
Lignes de précipitations des 2 Ag fusionnent
Que signifie une non-identité et à quoi ressemble la ligne de précipitation dans un tel cas?
Aucun épitope en commun
Lignes de précipitation se croisent
Que signifie une identité partielle et à quoi ressemble la ligne de précipitation dans un tel cas?
Un épitope est commun aux deux préparations d’Ag, mais un autre épitope reconnu est uniquement présent sur un des deux Ag
Éperon formé
Qu’est-ce qu’un Ag particulaire?
Bactérie, globule rouge ou autre cellule possédant des Ag à sa surface
ou
Billes synthétiques sur lesquelles on a fixé des Ag
Qu’est-ce qu’une réaction d’agglutination?
Formation de petits agrégats constitués d’un réseau de complexes immuns lorsqu’on met en contact des Ag de type particulaire à leur anticorps spécifique
Qu’est-ce que l’hémagglutination directe?
Met en évidence des Ag naturellement présents à la surface des globules rouges ou hématies
Dans quel but utilise-t-on fréquemment l’hémagglutination directe?
Identification du groupe sanguin (présence ou absence de certains Ag de surface sur les globules rouges)
Que permet l’hémagglutination indirecte?
Permet de mettre en évidence la présence d’Ag fixés artificiellement à la surface des globules rouges
De quelle façon des globules rouges pourraient-ils adsorber des protéines?
Traiter les globules rouges à l’acide tannique
Décrire l’hémagglutination.
Observée après sédimentation des globules rouges au fond d’un tube
Globules rouges forment un large disque au fond du tube
Si non agglutinés : se déposent en un petit point dense
Comment détermine-t-on la concentration optimale d’acide tannique à utiliser pour traiter les globules rouges (décrire de façon générale)?
Faire des dilutions croissantes d’acide tannique et ajouter les globules rouges : incuber puis centrifuger et observer l’agglutination au fond des tubes : La plus forte concentration en acide tannique qui ne montre aucune agglutination des globules rouges est la concentration optimale pour traiter les globules rouges
Dans quelle solution doit-on faire les dilutions d’acide tannique?
PBS 1X
Décrire globalement les étapes du traitement des globules rouges de mouton.
Transférer les globules rouges dans un tube conique, ajouter l’acide tannique (même volume que les globules rouges), mélanger délicatement et incuber : laver les cellules dans du PBS 1X (centrifuger, enlever surnageant, ajouter PBS, remettre en suspension, centrifuger et enlever surnageant, ajouter PBS pour amener au volume initial)
Peut-on laisser des globules rouges traités à l’acide tannique au frigo par exemple pour les utiliser plus tard?
Non, ils doivent être utilisés immédiatement (comme les maudites cellules compétentes mausus sinon tu scrap ta transfo 5 fois)
Décrire globalement les étapes du couplage de l’Ag aux globules rouges de mouton.
Dans un tube conique mélanger : globules rouges traités à acide tannique, saline tamponnée et Ag : incuber, centrifuger, laver 2 fois, remettre les globules rouges en suspension dans du PBS 1X contenant du sérum de lapin pour retrouver le volume initial
Quel Ag est couplé aux globules rouges dans le protocole des notes de cours?
BSA albumine bovine
Le complément est-il actif dans l’antisérum?
Non, il a été inactivé par une incubation (30 min à 56 degrés)
Pourquoi le complément doit-il être inactivé dans l’antisérum?
Pour empêcher la lyse des globules rouges par celui-ci
Dans quelle solution doit-on diluer l’antisérum anti-BSA?
PBS 1X
Que représente un résultat positif? (Qu’est-ce qu’on observe qui nous permet de dire que le résultat est positif?)
Agglutination des globules rouges : formation d’un réseau et donc la réaction couvre tout le puits
