Salah Flashcards
Quelle condition doit respecter le promoteur et terminateur ?
Si on veut transformer un eucaryote, il faudra utiliser promoteur et terminateur eucaryotique. On
P35S est un promoteur…
Fort et constitutif.
Comment constituer une séquence pour une transformation ?
On prend une phase codante, additionnée d’un promoteur et d’un terminateur ainsiq u’une séquence de restriction qui ne s’hybridera pas avec ce qu’on va cloner.
Comment intégrer la séquence dans un plasmide ?
On a la séquence de cDNA entourée de deux séquences de restriction : on coupe avec R1 et R2 ,puis on procède à une ligation dans un plasmide intermédiaire, ce qui le transforme en plasmide recombinant.
Qu’est-ce qui différentie vecteur de plasmide ?
Un plasmide est extra chromosomique et autoréplicatif. Un vecteur a 3 trucs de plus : origine de réplication, stricte ou à large spectre d’hôte, cassette, et gène de sélection.
C’est quoi la transcription run-off ?
C’est que lors d’une TIV, pas besoin d’avoir un terminateur de transcription. La polymérase se décroche tout seul au bout d’un moment.
A quoi sert le PEG ?
C’est un agent avide d’eau qui augmente la concentration des trucs en solution. Il est ausis utiliser pour intégrer l’AN en le précipitant sur le cellule puis en l’intégrant par dilution graduelle.
Quelles sont les techniques utilisées pour transférer un ADN ?
1) micro-injection
2) PEG
3) fusion avec liposome
4) Electroporation
5) Bombardement
6) transfert biologique
C’est quoi un vecteur intermédiaire ?
C’est un 2e plasmide avec toutes les séquences qu’on veut intégrer et qui s’intègre par recombinaison homologue dans le plasmide récepteur.
Comment transforme on les bactéries ?
Par éléctroporation
Par conjugaison triparentale
Quel traitement du matériel végétal doit on effectuer?
Passer dans l’éthanol 70% pour péter les poils et virer la cire foliaire, puis la javel pour stériliser.
Comment transforme on le matériel végétal ?
On fait une coculture du matériel végétal avec les bactéries modifiées. Puis après deux jours on fait une une culture sur milieu sélectif.
Donner la succession d’étapes pour obtenir une plante transformée.
On régénère des jeunes pousses à partir du matériel végétal, puis mis en culture en milieu de sélection pour inhiber la croissance bactérienne
Puis, on fait croitre un peu les jeunes pousse puis on les repique sur un milieu d’enracinement
On repique sur terre stérile : c’est les plantes R0, dont on prend les graines pour les faire pousser sur milieu sélectif
On obtient ensuite des générations suivantes pour obtenir au final que des homozwgotes stables.
Comment suivre l’expression des marqueurs ?
Les plantes qui poussent sur milieu sélectif ont bienintégré le gène de résistance
On peut suivre un éventuel gène marqueur (GUS ou GFP).
Comment analyser les échantillons obtenus par transgénèse végétale ?
PCR, SB, NB, WB
