Maria - cours 1

Question 1

Un plasmide comporte (4 trucs) ?

Answer 1

• Origine de réplication
• Gène de sélection
• un ou deux promoteurs en orientation inverse
• Cassette de clonage

Question 2

Plasmide bluescript : comporte ?

Answer 2

Marqueur de sélection ApR
Origine de réplication à haut nombre de copies
Alphacomplémentation

Question 3

Quelles utilisations pour les plasmides ?

Answer 3

Clonage 
Production d'ADN sb 
TIV
Marquage
études fonctionnelles

Question 4

Les plasmides utilisés ne comportent généralement pas de séquences terminatrices de transcription. Comment arrêter ?

Answer 4

On linéarise le vecteur en aval de l’insert pour limiter la transcription au seul fragment inséré.

Question 5

Quels sont les ingrédients pour une TIV ?

Answer 5

Plasmide, Tapmon, rNTP, Rnasin, ARNpol.

Question 6

Quand on fait une TIV, comment vérifier la présence des ARN ?

Answer 6

Hybridation moléculaire

Détection du produit de traduction

Question 7

pGBKT7 : origines de réplication ?

Answer 7

E.Coli ET levure

Question 8

Qu’est-ce qu’un système inductible ?

Answer 8

tet-on tet-off : mais comment ça marche?

Question 9

Qu’est-ce que pET ?

Answer 9

C’est un vecteur d’expression bactérien pouvant fonctionner en système in vitro. Son expression est inductible.

Question 10

Comment peut on coupler transcription et traduction in vitro ?

Answer 10

En utilisant des vecteurs d’expression en systèmes acellulaires : du coup l’incorporation d’un acide aminé radioactif permet l’obtention de protéines marques, pouvant être utilisées comme sondes.

Question 11

Quel avantage du couplage TIV et traduction ?

Answer 11

Permet l’obtention très rapide des protéines, en continu. En plus on peut utiliser des matrices circulairesm linéaires ou produits de PCR.