Maria - interaction protein protein Flashcards
Principe de la chromato d’affinité ?
On fusionne une des protéines à une étiquitte et entraine les partenaires lors de la purification par affinité. On peut la faire en tandem avec 2 étiquette pour éliminer un max de contaminants.
Principe de co-immunoprécipitation ?
Billes d’agaroses avec des protéines A ou G, et la protéine d’intérêt est fixée par les anticorps. Si une protéine interagit, elle aussi sera fixée indirectement.
On fait généralement un marquage radioactif d’une des protéines pour la visualiser (sur gel).
GST-Pulldown : principe ?
On a une protéine bait fusionnée avec la GST, qu’on immobilise sur une colonne.. Si il y a une interaction avec une protéine, elle sera fixée à la colonne et on l’éluera avec du glutation. Puis, SDS ou MALDI TOF.
Comment obtient on la protéine fusion GST ?
Avec un plasmide PGEX.
Comment marquer une protéine radioactivement ?
S35-Met
Principe du Far-Western ?
Lyse, puis séparation sur gel des protéines “proies” et transfert sur membrane. On utilise ensuite une protéine appat pour révéler la protéine proie, avec de la luminescence ou radioactivité.
Principe de la Résonance Plasmonique de Surface,
On fixe une protéine sur une puce en verre avec du dextran et de l’or. On fait passer une lysat cellulaire puis on fait passer de la lumière : si il y a interaction avec une protéine, l’angle de réfraction est changé. Marche avec système microflux
Principe de la gel filtration ?
Cela sépare les protéines selon leur taille : en effet, si formation d’un complexe, la taille est plus importante etle profil d’élution sera différend.
Peut on utiliser la gel friltration avec n’importe quoi ?
Non, ne marche pas avec un lysat cellulaire : les protéines doivent être purifiées, c’est une technique de VERIFICATION.
Principe du Cross Linking ?
On lie 2 protéines avec un agent de pontage
Quelles techniques peuventêtre réalisées in vivo ?
Co-IP, GST-PullDown
