RT Flashcards
Processus nutritionnel
Autotrophe : Carbone provient du CO2
Hétérotrophe : C provient de la dégradation des substances organiques (inclu la plupart des microorganismes d’interet médical)
Fonction de la paroi bactérienne
Donne forme Protège des chocs osmotiques Site fixation de certains antibio SIte fixation bactériophage (O) Antigénique Déffirenciation au gram
Composition parois Gram pos vs Neg
Pos: Peptidoglycane ++
Acide téichoique
Peu de lipides (1-3%)
Neg: Mince peptido
Lipopolysaccharides
Lipides ++ (11-22%)
Le chromosome bactérien
Seul Circulaire Pas d'histone Pas de noyau Libre Division par scissiparité (fission binaire)
Capsule
Antigène K
Protège de la phagocytose
Facteur de virulence
Plasmide
Molécule d’ADN de petite taille
Indépendante du génome bactérien, se réplique de façon indépendante
Facteur de virulence (Prod toxine, résistance aux atb)
Flagelle
Antigène H
Facteur de virulence
Pili sexuel
Permet échange de plasmide par conjugaison
Transfert de matériel génétique entre bactéries :
Transformation (Échange entre même espèce)
Conjugaison (Pili)
Transduction (sans contact, via bactériophage)
Coloration simple vs différentielle
Simple : 1 colorant , pas d’étape de décoloration
Diff: Au moins 2 colorants, étape de décoloration
Principe de la coloration de Ziehl
Basé sur la composition de la parois riche en lipides (acide mycolique et phospholipides)
1- Fuchsine basique en chauffant
2-Alcool-acide (BAAR Résistent)
3- Bleu méthylene ou vert malachite
Coloration d’albert
Mise en évidence des granulations métachromatiques de Coryne (Diphtariae)
1- Colorant (Vert malachite/bleu toluidine / acide acetique-ethanol)
2- Lavage
3-Lugol
Coloration Schaeffer-Fulton (Vert malachite)
Mise en évidence des endospores (Clostridium, Bacillus)
1- Vert + chauffage
2-Lavage
3-Safranine (contre-colorant)
Mise en évidence des BAAR
Débute par auramine (non-spécifique)
Confirme BK avec Zielh
Mésophile vs Psychrophile vs Thermophile
Meso : 35
Psychro : 0-30
Thermo : 50-80
pH des milieux de culture
7.2
Bactéries Halophiles
S.aureus (7.5% NaCl)
Vibrio cholerae
Milieu de culture réduit
Bouillon additionné d’un agent réducteur
En présence de l’agent réducteur l’O2 est mobilisé = plus dispo = diminution du potentiel rH
Thioglycolate ou Cystine
Thio avec Résazurine = rose en présence d’O2 = pas bon
Courbe de croissance bactérienne
1- Latence
2- Logarithmique / exponentielle
3-Stationnaire (mort = division)
4-Déclin
Décompte de cellules viables
Valable entre 30 et 300 UFC
Si trop élevé = diluer
Milieu de culture de base doit contenir
Peptones
Extrait de viande
Phosphates
NaCl
Exemples de milieux nutritifs (Milieux de base)
MH
BHI
TSA-TSB
Viande
Exemples de milieux enrichis (additionnés de facteurs de croissance)
GS
Choco
Exemples de milieux sélectifs (Milieux qui favorisent la croissance de certaines bact / Inhibent la croissance d’autres, et qui contiennent subs sélectives/inhibitrices)
MAC
SS
MSA
CNA
Particularités de la MAC, aspect sélectif
Isole gram -
Inhibe Cocci et les gram +
Substances sélectives : Violet de cristal et sels biliaires
Particularités de la SS, aspect sélectif
Substances sélectives : Vert brillant et sels biliaires
Particularités de la MSA, aspect sélectif
Isole Staph
Substance sélective est le NaCl à 6.5-7.5%
Particularités de la CNA, aspect sélectif
2 antibiotiques : Colistine et acide nalidixique, inhibent les gram - , donc isole les gram +
Permet d’observer l’hémolyse
Milieux différentiels
Permet de différencier une bactérie selon sa capacité à dégrader un substrat.
Dégradation entraine un produit acide ou basique
Mise en évidence du pH grâce à un indicateur(changement de couleur)
Exemples de milieux différentiels
MAC
SS
MSA
Particularités de la MSA, aspect différentiel
Substrat : Mannitol
Indicateur de pH : Rouge de phénol
Milieu jaune = Mannitol +
Milieu rose = Mannitol -
Particularités de la MAC, aspect différentiel
Substrat : Lactose
Indicateur de pH : Rouge neutre
Particularités de la SS, aspect différentiel
Substrat : Lactose
Indicateur de pH : Rouge neutre
Substrat : Thiosulfate de Na
Indicateur de pH: Citrate de Fer
Milieux d’enrichissement
Bouillon Sélénite de Na (Favorise Salmo)
Principe de la coagulase
Coagulase catalyse la transformation du fibrinogène en fibrine.
Coagulase est un facteur de virulence
Test à la bacitracine
Permet de distinguer Staph(R) de Micrococcus (S) >ou= à 10mm
Test à la novobiocine
Identification présomptive de S.saprophyticus (S) <=16
Autres Staph sont (R)
Principe du OF
1% sucre
Un peu de peptones
Dégradation du sucre = acide = changement au jaune
Dégradation des peptones = alk = Bleu
Donc contrôle doit être bleu (ne contient pas de sucre)SEULEMENT EN SURFACE , DÉGRADATION DES PEPTONES NE SE FAIT PAS EN ANA.
Tube test : Si jaune = acide = sucre dégradé
Si vert = pas dégradé
Surface = O+ Fond = F+
Composition du Kligler
0.1% glucose 1% lactose Peptones Rouge phénol Citrate ferrique et thiosulfate de Na
Principe du Kligler
Bact utilise toujours le glucose en 1er
Ensuite si elle le dégrade elle ira vers le lactose, sinon les peptones(Peptones seulement en O2 donc sur la pente)
Jaune = acide Rose = Alk
Milieu TSI
Similaire au Kligler mais avec ajout de sucrose 1%
Test VP
Visualisation de la production d’acétoine suite à la fermentation du glucose
2 réactifs
1-Alpha-naphtol
2-KOH 40%
ONPG
Pour dégrader lactose bact a besoin de 2 enzymes
- B-galactosamide-perméase (permet au Lactose d’entrer)
- B-galactosidase :Permet de scinder le lactose
Dans ce test ONPG est le substrat (remplace le lactose)
Toluène lyse la bactérie et libère B-galactosidase
Épreuves pour le lactose
Mac/SS
Kligler ou TSI
ONPG
Épreuves pour le glucose
OF
Kligler ou TSI
Glucose en tube (Bouillon)
MR et VP
Épreuve de la gélatinase technique de Frazier
Détecter la gélatinase, enzyme capable de dégrader la gélatine en AA
Halo clair autour de la zone de croissance suite à l’ajout du réactif = Gélatinase +, car les AA produits sont solubles
2 réactions possibles au métabolisme des AA
- Décarboxylation (COOH)
- Désamination (NH2)
Épreuves pour l’étude de la décarboxylation
LDC
ODC
Si l’enzyme est présente elle attaque la portion Carboxyl = production d’une amine , pH alCalin = violet
Doit se faire en ana = huile
Attention, tube est violet au départ!
Réaction : -Utilisation du glucose = acide = jaune puis utilisation de l’aa = alcalin = violet
Épreuve pour la désAmination
PDA
Tryptophanase (INDOL)
Enzyme attaque la portion amine = formation de composés Acides
Réaction en O2
Mise en évidence du produit se fait suite à l’ajout d’un réactif.
Indol : James/Kovak : Pos = Rouge
Étude du métabolisme des lipides
Test de Nagler (lécithinase), gélose à base d’oeufs
Pos = zone de précipitation autour de la zone de croissance (Car diglycérides formés sont insolubles)
Test de réduction des nitrates
But: Détecter la nitrate-réductase
NO3-NO2-N2
Étape 1 : Ajout de A (Acide sulfanilique) puis B(alpha naphtylamine)
SI Rouge = Nitrates +, Fin du test
Si incolore : Ajoute poudre de Zinc
Si rouge = Nitrates non réduits No2-N2-
Si incolore = nitrates réduits au delà des nitrites No2-N2+
Citrate de Simons
Ne contient pas de glucose, seulement du citrate
Milieu Urée
Détection de l’uréase
Rose fuschia = Pos
Épreuve de DNase
Après incu : ajout d’un révélateur HCL = mise en évidence des nucléotides solubles présents autour de la strie
Hydrolyse de l’esculine
Détecter Beta-glucosidase, la bactérie doit pouvoir croitre en présence de bile
Hippurate
Milieu liquide
Révélateur (Ninhydrine) = pourpre si pos
Quelle réaction utilise la paradymethylbenzaldehyde?
Indol
Indicateur de pH Citrate Simmons
Bleu de bromothymol
Reactif pour detection des nitrates
A(Acide sulfanilique) puis B(alpha naphtylamine)
Reactifs VP
1-Alpha-naphtol
2-KOH 40%
Stérilisation
Élimination de toutes formes de vie microbienne
Désinfection
Élimination des pathogènes végétatifs sur support inerte (Ne détruit pas les spores)
Antisepsie
Élimination des pathogènes sur tissus vivants
Décontamination
Élimination des pathogènes végétatifs sur support inerte et tissus
Résistance des microorganismes, plus sensible au plus résistant
Virus enveloppé Gram + Virus non enveloppé Gram - Mycobactéries Spores bactériennes
Mécanisme d’action des antimicrobiens
- Altere paroi cellulaire
- Altere permeabilite de la membrane
- Déteriore proteines cytoplasmiques et enzymes
- Deteriore acides nucléiques
Indicateur biologique à passer à l’autoclave
Bacillus stearothermophilus
Pasteurization
Chauffage a 72 x 15 secondes puis refroidissement rapide a 10 degrés
Tyndallisation
Chauffage modéré, alternance chauffage/incub
Détruit bactéries et spores
Inspissation
Sterilisation des milieux a base d’oeuf ou serum
Indicateur biologique à passer au four Pasteur
Bacillus subtilis
Bris de verre dans une centrifugeuse *RT
Laisser reposer
Autoclaver les godets
Desinfecter cuve au glutaraldhyde
Efficace sur Mycobacterium tuberculosis
Si deversement : phénol 5% 10-30 minutes ou glutaraldéhyde 30 min
Flore normale de la peau
SCN
Corynebacterium sp
levures
Flore normale respiratoire sup
S. viridans
S. epidermidis
S.aureus
Flore normale digestive
S.viridans Ana Levures E.coli Bacterioides Enterococcus faecalis
Flore normale vaginale
Lactobacillus
Types d’infections causées par S.aureus
Furoncle Panaris Impetigo Ostéomyelite Septicémie Choc toxique (exotoxine)
Concentration des selles
Sedimentation au formol-ether
Couche du fond = parasites conserve
Dessus = formol * Jeter*
Dessus= débris Jeter
dessus= ether Jeter
Kyste vs Trophozoite
Kyste dans selles solides
Tropho dans selles liquides