Récepteurs nucléaires Flashcards
1
Q
Vrai ou faux, les hormones stéroïdiennes sont hydrosolubles
A
Faux, liposolubles
2
Q
Que sont les hormones stéroïdiennes ?
A
Messagers chimiques véhiculés par le sang liés à des protéines de transport et qui affectent l’activité des tissus/organes cibles en
s’associant à des récepteurs spécifiques.
3
Q
Exemples d’hormones stéroïdiennes (dérivées du cholestérol).
A
Glucocorticoides, minéralocorticoides, progestérone,
androgènes, estrogènes
4
Q
Exemples de dérivés de la vitamine D. (provient du cholécalciférol par UV)
A
Vitamine D2 (calcifédiol), D3 (calcitriol; 1,25-(OH)2vitamin D3)
5
Q
Exemples d’hormones thyroïdiennes (dérivées de la tyrosine) ?
A
Thyroxine (T4) et la triiodothyronine (T3
6
Q
Exemples d’eicosanoïdes (dérivé d’acides gras)
A
Prostaglandines, leucatriènes
7
Q
Que sont les protéines de transport ?
A
De par leur nature lipophile, les hormones lipidiques doivent se lier à des protéines de transport dans la circulation sanguine
8
Q
Caractéristiques de l’albumine. (3)
A
- Protéine plasmatique produite par le foie
- 60 % des protéines circulantes
- lie hormones thyroidiennes (15-20%), stéroidiennes (80% P4,
50% aldo, 10-20% cortisol), acides gras, bilirubine,
médicaments, etc
9
Q
Caractéristiques du CBG (cortisol binding globulin) ou transcrotine ? (2)
A
- α-globuline hépatique, 2-3x
⬆ en fin de gestation - lie 80-90% du cortisol (inactif), 20% aldostérone, 20% P4
10
Q
Caractéristiques du SHBG (sex hormone binding globulin) ? (2)
A
- Lie dihydro-testostérone (DHT), testostérone, estradiol, DHEA
- ⬇ cause hyperandrogénisme, cancer utérus; en gestation
11
Q
Caractéristique des TBG (thyroxin binding globulin). (1)
A
- lie 70% T3, T4
12
Q
Comment est-ce que la première évidence d’un récepteur stéroïdien a été trouvé ?
A
À l’aide de la liaison au E2
13
Q
REVOIR DIAPOSITIVE 5 ET ENREGISTREMENT AVANT 50 MINUTES
A
QUESTION
NOIR: IDENTIFIÉ SANS LIGAND
ROUGE : IDENTIFIÉ SANS LIGAND ET PUIS ON A TROUVÉ LE LIGAND
BLEU/MAUVE : TROUVÉ GRÂCE AU LIGAND
14
Q
Quelques fonctions associées à des récepteurs nucléaires
A
- Différentiation et croissance cellulaire-tissulaire- Fonctions de reproduction, fertilité (ER, PR, AR) - Métabolisme et homéostasie: lipogénèse, balance
énergétique, homéostasie du cholestérol (PPAR, LXR, FXR)- Développement fœtal et organogénèse: surrénales, gonades
(SF-1), placenta (ERR)- Désordres métaboliques et endocriniens: résistance aux
hormones (TR, AR)- Variance génétique (ER, AR); translocation chromosomique
(RAR)- Développement et croissance tumorale (ER)
15
Q
caractéristiques des récepteurs nucléaires.
A
- Famille multigénique de facteurs de transcription
- 48 récepteurs nucléaires qui partagent une structure
protéique commune - activables suite à la liaison spécifique de leur ligand
(liaison protéine-hormone). - s’associent directement aux régions promotrices des
gènes cibles (liaison protéine-ADN) - permettent la transcription des gènes (liaison protéine
protéine avec coactivateurs et machinerie transcriptionelle
de base) - majoritairement nucléaire. Certains (comme GR) sont
cytoplasmiques lorsque inactifs (absence de ligand)
16
Q
structure protéique des récepteurs nucléaires, partie AF-1. (partie A/B) (3)
A
- hypervariable
- transactivation
- associe cofacteurs
17
Q
Structure protéique des récepteurs nucléaire, partie Zn++ (C) ? (4)
A
- hautement
conservé - liaison à l’ADN
- dimérisation
- localisation
nucléaire
18
Q
Structure protéique des récepteurs nucléaire, ligand - AF-2 (E) ? (5)
A
- très conservé
- liaison du ligand
- transactivation
- hsp90
- associe cofacteurs
19
Q
Activation et translocation nucléaire pour le GR cytoplasmique.
A
L’arrivée du ligand provoque la dissociation de la chaperone HSP90 et la translocation au noyau du complexe récepteur-ligand
20
Q
Comment est-ce que l’on observe en laboratoire la la translocation nucléaire du récepteur GR en réponse au ligand dexamethasone.
A
À l’aide de green fluorescent protein (GFP)
21
Q
Que peut on dire de la présence des structures de doigts de zinc chez les H. sapiens comparé aux autres expèces.
A
Beaucoup plus fréquents
22
Q
Caractéristiques des doigts de zinc C2H2 ?
A
- Sp1, TFIIIA
- 2 cystéines
- 2 histidines
X2
23
Q
Caractéristiques des doigts de zinc C4 ?
A
- récepteurs nucléaires
- 4 cystéines
24
Q
Caractéristiques des doigts de zinc doigt de zinc C6 ?
A
- Cordonne 2 ions Zn
- Facteur Gal4 de levure
- 6 cystéines
25
Qu'est-ce qui est présent dans la structure de tous les récepteurs nucléaires ?
8 cystéines pour permettre la liaison (pourrait être remplacé par des histidines)
26
Vrai ou faux, les récepteurs protéiques nucléaires agissent dimères ?
Vrai
27
Exemple de la luciférase et de son mécanisme.
Hormone comme E2 se lie à son récepteur qui lui même se lie au binding site du promoteur ce qui produit de la cDNA luciférase. On remarque ensuite que l'activité transcriptionnelle de la luciférase est grandement augmentée en présence de l'hormone.
28
Qu'est-ce qui se passe lorsque l'on bloque 1 binding site du promoteur pour la luciférase ?
Diminution de l'expression de la luciférase
29
Qu'est-ce qui se passe lorsque l'on bloque tous les binding site du promoteur pour la luciférase ?
Arrêt de l'expression de la luciférase
30
Où est-ce qu'une mutation du gène de la luciférase aura le moins d'effet sur son expression ?
Une mutation en dehors du promoteur aura un plus petit effet
31
Sous quelle forme de dimère prenne sont toujours les récepteurs nucléaires (stéroïdiens) ?
Sous forme de palindrome
32
Que signifie par exemple ER-ER (IR-3)
On a ici un récepteur palindromique avec 3 acides aminés qui sépares le plaindrome
33
Que signifie VDR-RXR (DR-4) ?
On au ici un récepteur direct avec 4 aa avant la répétition
34
Comment donc est-ce que les récepteurs palindromiques sont différentiées les uns des autres ?
Avec le binding site, celui en dehors du palindrome
35
Qu'est-ce que l'approche ChIP ?
C'est le séquençage des brins d'ADN qui sont les cibles des récepteurs. L’analyse ChIP
(immunoprécipitation de la
chromatine) permet
d’identifier les sites de
liaison des récepteurs
nucléaires sur les gènes.
36
Vrai ou faux, est-ce que le récepteur des estrogènes peut interagir avec des séquences très loin du gène des l'œstrogène ?
Oui, plus de 100 000 pb de base plus loin
37
Pour activer l'expression des œstrogènes, est-ce que les éléments de régulation distale sont plus ou moins efficace pour les facteurs de transcriptions ?
Plus efficace
38
Qu'est-ce qui se passe dans un état peu activé avec les œstrogènes ?
Le FoxA1 est activé, il pourrait recruter les récepteurs. Elle serait requise pour faciliter l'arrivée du récepteur des œstrogènes.
La protéine FoxA1 agit comme pionnier facteur à la réponse estrogénique des gènes en dictant l’arrivée de ERa aux éléments ERE du génome.
39
Qu'est-ce qui se passe lorsque en grande présence d'œstrogènes avec le FoxA1 ?
L'expression de FoxA1 est grandement diminué, tandis que les récepteurs sont grandement activé
40
Où est-ce que le ligand s'installe dans le récepteur nucléaire ?
Dans une poche hydrophobe avec des liaisons des différents acides aminés
41
Quelle est la différence de structure du récepteur de l'oestrogènes en présence d'agoniste vs antagoniste.
L'agoniste permet d'avoir une structure fermée de l'hélice 12 ce qui expose les acides aminés qui viennent chercher les cofacteurs ce qui favorise la transcription. C'est l'AF-2, celle qui est ligand dépendant, c'est important pour elle d'avoir une interaction avec le ligand.
L'antagoniste empêche l'hélice 12 de se fermer, ce qui empêche l'AF-2 d'interagir avec les cofacteurs ce qui empêche donc d'activer le récepteur
42
Qu'est-ce qui arrive si on enlève l'AF-2 d'un récepteur ?
Diminue l'activité de la luciférase
43
Qu'est-ce qui arrive si on enlève complètement le domaine d'interaction avec le ligand.
Enlève presque tout l'activité de la luciférase, mais reste quand même un ti peu d'activité.
44
Qu'est-ce qui arrive si on enlève le point de contact avec l'ADN du récepteur ?
Perte totale d'activité de la luciférase.
45
Quelles sont les deux façons d'activer le récepteur ?
AF-1 et AF-2
46
Activation AF-1
* majoritairement située dans la portion N-terminale des récepteurs
* ne lie pas l’hormone
* activée principalement par la phosphorylation (facteurs de croissance)
* permet le recrutement de coactivateurs transcriptionnels
47
Activation AF-2
L’AF-2
* située dans la région C-terminale
* activée par le ligand
* consiste en une hélice α (H-12) riche en Leucine qui se referme sur
la cavité hydrophobe qui accueille le ligand (mouse trap model)
* permet le recrutement de coactivateurs transcriptionnels
48
Quelle activation (AF-1 ou AF-2) montre la plus grande réponse ?
AF-2
49
Qu'est-ce qui se passe lorsque AF-1 et AF-2 sont activés en même temps ?
Réponse plus grande que juste avec l'hormone sans facteurs de croissances
50
Caractéristiques du récepteurs des oestrogènes ERa
- cDNA cloné en 1985 à partir de cellules cancéreuses du sein
MCF-7- encode une protéine de 66KDa - chromosome 6q25.1- exprimé dans les tissus reproducteurs: utérus, ovaire, glande
mammaire,
et autres tissus: hypothalamus, foie, os- module l'expression de gènes cibles: PgR, lactoferrin
(grossesse, implantation, lactation)- mitogène dans la croissance tumorale des tissus
reproducteurs, mais sa présence apporte une ligne de
traitement par les antiestrogènes SERMs (50-70% efficace)
51
Que peut on dire sur les ER et le cancer du sein ?
On utilise le tamoxifène qui est un antagoniste (bloque) du récepteur de l'oestrogène parce que les oestrogènes sont responsables du cancer du sein (activité oncogénique ?). Le tamoxifène bloque donc l'AF-2.
52
Que fait le fulvestrant ?
Il dégrade le récepteur, donc AF-1 et AF-2
53
Quel est le problème commun au tamoxifène et fulvestrant ?
Développement d'une résistance thérapeutique
54
Que fait le raloxifène ?
Bloque le récepteur aux œstrogènes au niveau du sein, mais le laisse au niveau de l'os. Problème, c'est un agoniste de ce récepteur au niveau de l'endomètre.
55
Caractéristique de la souris aERKO
- - - - - - -
viable mais infertile (modèle de résistance aux
estrogènes)
utérus hypoplasique de petite taille.
effets estrogéniques de EGF sur l’utérus supprimés
absence d’ovulation, folliculogénèse immature
boucle FSH/LH-estrogènes déficiente (axe HHG)
glande mammaire rudimentaire (voir SRC-3, slide 50)
effets prolifératifs de EGF diminués
phénotype similaire à la souris PRKO
phénotype d'activité résiduelle d'estrogènes (ERβ ??)
56
Pourquoi est-ce que l'on ne soupçonnait pas qu'il y avait un récepteur alpha et beta du ER
Parce que c'est le seul trouvé jusqu'à présent qui en a un, des récepteurs stéroïdiens
57
Caractéristique du récepteur des œstrogènes beta
- cDNA cloné en 1996 (11 ans plus tard que ERa !)- encode une protéine de 59KDa - chromosome 14q- exprimé dans les tissus reproducteurs: utérus, ovaire, glande
mammaire, et autres: hypothalamus, prostate, os- affinité similaire à ERa pour l’estradiol- rôle physiologique moins bien défini - Potentiel mitogène pour les tissus reproducteurs et valeur
prognostique encore
discutable
58
Caractéristique de la souris BERKO
* viable et fertile
* fertilité réduite chez les femelles (fonction ovarienne
diminuée) et normale chez les males
* processus de développement et lactation des glandes
mammaires normal (contrairement à aERKO)
* pas d’hypoplasie de l’utérus (contrairement à aERKO)
* problèmes de mémoire, apprentissage, hypertension,
hématopoièse déficiente (leucémie)
59
Caractéristique de la souris abERKO
* viable mais infertile (idem à aERKO)
* développement des gonades et tissus reproducteurs normal
chez le male mais déficient chez la femelle
* déficience dans la croissance et maturation osseuse. Idem
à aERKO mais pas βERKO
60
Caractéristique de l'humain ERKO.
- Inactivation du gène ERa (TGA au codon 157, exon 2) - Les parents sont porteurs hétérozygotes consanguins- Concentrations plasmatiques d’estrogènes anormalement
élevées (10x) avec testostérone normale.- FSH et LH augmentées (2x)- Maturation osseuse déficiente et ostéoporose - Croissance excessive (fermeture des épiphyses
incomplètes)- Aucune réponse à l’administration d’estrogènes
61
Qu'est-ce qui arriverait avec des filles qui ont er ERKO ?
Non viable
62
Environ diapo 40
