Química Biológica - Proteínas

Question 1

Explica fase estacionaria y fase móvil de CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR y su objetivo.

Answer 1

Fase estacionaria: polímero entrecruzado con poros de tamaño seleccionado en los que entran y se trancan moléculas.

Fase móvil: Solución buffer

El objetivo es la separación segun tamaño, las proteínas más pequeñas penetran en los poros y hacen un recorrido “menos directo ”, por lo que llegan mas tarde.

Question 2

Cuando es útil una CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR?

Answer 2

• Cuando se trabaja con biomoléculas que son sensibles a cambios de pH, concentraciones de iones metálicos, condiciones fisiológicas, etc
• La proteína se puede colectar en el buffer que se desea, dependiendo de los requerimientos de cada biomolécula.

Question 3

Cómo detecto la biomolécula de interés en CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR?

Answer 3

• La elución de proteínas se detecta generalmente espectrofotometricamente por absorcion de luz a 280nm

Question 4

Como funciona CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IONICO?

Answer 4

Separa molec. segun su carga.

Se basa en la adsorción reversible de moléculas cargadas sobre los intercambiadores.

Puede ser con matriz de intercambiador cationico (superficie cargada negativamente) o anionico (superficie cargada positivamente).

Question 5

Como funciona la CROMATROGRAFIA DE AFINIDAD?

Answer 5

Separa proteínas en base a su especificidad de unión.
Las proteínas que se quedan en la columna son aquellas que se unen especificamente al ligando en la resina.
Luego de que se da la separacion, la proteína de interés se eluye.

Question 6

Como calculo movilidad electroforetica? Las 2 formas:

Answer 6

μ=V/E

μ=q/6πrη

Question 7

Cómo varía la movilidad electroforética según el pH?

Answer 7

μ comienza a tomar valores negativos a partir del pI.

Question 8

Nombra ventajas de electroforesis nativa/no desnaturalizante

Answer 8

• Las proteinas siguen siendo funcionales
• A igual carga, migra mas la de menor tamaño
• Permite separar complejos proteicos

Question 9

Nombra desventajas de electroforesis nativa/no desnaturalizante

Answer 9

• Muchas proteínas no migran por no tener carga neta
• Proceso de separación es muy lento
• Proceso de separacion es afectado no solo por tamaño sino que tambien por forma

Question 10

Explica electroforesis desnaturalizante/SDS-PAGE

Answer 10

Electroforesis en la que las proteínas pierden su estructura nativa.
Se utiliza:
1. Calor
2. SDS es agente desnaturalizante
3. β-mercaptoetanol es agente reductor rompe S-S