Puces à lipides

Question 1

Immobilisation des lipides ?

Answer 1

• On fonctionnalise la surface des lames avec des 𝛶-aminopropylsilane (GAPS)
• Dépôt automatique des lipides par robot

Question 2

Vérifier immobilisation des lipides ?

Answer 2

• Après dépôt de lipides fluorescents, on rince une dizaine de fois dans tampon, ce qui provoque des forces de cisaillement
• Vérification qu’il y’ait encore fluorescence

Question 3

LIMA

Answer 3

Liposome microarray-based assay = Puces sur lesquelles on va déposer des liposomes

Utiliser pour étudier les interactions lipides/protéines.

Les liposomes permettent de faire varier la composition lipidique afin de reproduire des compositions variables qui pourraient mimer des processus de changement de composition dans le vivant (expl : cancer).

Question 4

Dépôt des liposomes

Answer 4

• Mélange de lipide que l’on met sur une surface de couche d’agarose sèche
• Auto-organisation très rapide
• Possibilité de faire varier leur taille en fonction de l’épaisseur de la couche d’agarose

Question 5

Normalisation du signal (pas normalisation entre les laboratoires avec seuil…etc)

Answer 5

Permet de voir s’il y’a une variation.

On prend une protéine fluorescente ou une protéine de fusion (avec la GFP) de la protéine qui nous intéresse.

On détermine le nombre de protéine tag GFP et on regarde la fluorescence de la protéine et aussi des liposomes seuls.

On fait une analyse d’image, une normalisation pour ramener le nombre de protéine à la quantité de liposome sur le spot. Car ce que l’on suit au microscope c’est les liposomes mais dur de les compter. Donc on utilise la fluorescence des liposomes.
Protéine (GFP) / Marqueurs de liposome = Intensité de fixation normalisée (NBI)