Puces à cellules

Question 1

Constitution des spots ?

Answer 1

Cellule en suspension dans goutte de 4 uL avec milieu cellulaire sur une lame de verre.

Question 2

Surface tension microarray

Answer 2

• On met les cellules dans des gouttes où il y a le milieu nutritif pour qu’elles vivent.
• On met une substance hydrophobe afin de circonscrire les groupes à un diamètre donné. On crée des zones sur la lame de verre qui sont hydrophiles et d’autres qui sont hydrophobes.

Question 3

Trieur de cellules

Principe ?

Fonctionnement ?

Matériel ?

Avantage ?

Résumé ?

Answer 3

Capture de cellules à la surface d’une puce et permet de les analyser.
On part d’un milieu biologique complexe (sang ou sérum). On tri les cellules en fonction de leur taille car différence de taille entre cellules tumorales et saines.

• Les cellules les plus grosses vont être capturé au niveau des barrières pour faire des analyses, les plus petites vont contourner la barrière, en restant dans leur flux d’écoulement d’origine.
• On va creuser de petites cavités pour piéger les cellules tumorales pour les analyser sur la puce
• On peut détacher les cellules des cavités en mettant un flux inverse pour les récupérer et les analyser en dehors de la puce.
• On utilise du PDMS (polydiméthylsiloxane) comme structure car c’est transparent
• des canaux microfluidiques

Avantages :

• On peut mettre tous les réactifs nécessaires (lyse des cellules pour récupérer les acides nucléiques, inhibiteur…)
• Peut mettre de gros volume

Résumé : On a développé une plateforme qui est le microtrieur pour séparer des populations cellulaires très différentes. On peut faire des analyses moléculaires multipliées : on peut identifier les cellules tumorales et les distingués des autres. Mais on peut aussi récupérer les ARN pour les analyser…etc on peut faire plusieurs analyses après la capture des cellules voulues.
Ne pas oublier qu’il y’a un flux et donc qu’il peut y avoir un impact sur les résultats.

Question 4

Life on a microarray : comment regarder les fonctions sur des cellules vivantes

Answer 4

(NB : Il faut parler de tout ce qui concerne les cellules. Et ce qu’on a fait avec les puces à protéines pour la détection/immobilisation…etc Donc pas regarder les tissus car état figé.)

On peut déposer des anticorps sur une puce puis mettre les cellules. On peut mettre aussi des ligands. Ou fixer les cellules.

Sur une puce on peut mesurer :
la différenciation
la prolifération
l’apoptose

Pour regarder la phosphorylation, on utilise des anticorps qui reconnaissent des protéines phosphorylées.

On peut utiliser le support puce pour regarder la sécrétion de la ou les protéines d’intérêt :

• immobilise la cellule dans puits sur la puce
• sécrétion des protéines d’intérêts avec capture par anticorps fixé sur la puce
• on fait un dosage de type sandwich ou utilisation d’un colorant