Proteinrensing og proteinanalyse

Question 1

hva er målet med elektroforese?

Answer 1

metode å finne ut proteinets:
- ladning
- størrelse
- renhet til makromolekylene

Question 2

3 metoder av elektroforese

Answer 2

1. SDS-PAGE
2. isoelektrisk fokusering (IF)
3. 2D-gelelektroforese

Question 3

SDS-gel

Answer 3

separasjon av proteiner etter størrelse
SDS-molekyler må omringe proteinet for å nøytralisere siden denne metoden fungere kun om alle proteinene har samme ladning

Question 4

Isoelektrisk fokusering (IF)

Answer 4

separasjon av proteiner etter ladning
proteinene beveger seg helt til de når sitt isoelektrisk punkt (IP)
- IP er pH-verdien hvor ladningen er på 0. helt vil det skje ingen migrasjon

Question 5

2D gelé elektroforese

Answer 5

kombinasjon av IF og SDS-gel
først blir proteinene separert etter ladning og så etter størrelse
- dette blir gjort på en SDS-PAGE

Question 6

hvorfor bruker vi proteinrensing?

Answer 6

når vi ønsker en ren versjon av et protein for f.eks forskning eller i medisin

Question 7

1. homogenisering

Answer 7

mekanisk metode å bryte membranen til en celle for å frigjøre innholdet
- French press -> tvinge cellen gjennom trangt hull. utvidelsen ved at cellen kommer ut vil sprekke cellen
- ultralyd -> høy frekvens lyd for å sprekke cellen
- detergent -> vaskemiddel for å lage hull i plasma membranen
- shearing -> skjære membranen

Question 8

3. kolonnekromatografi

Answer 8

ulik separering av proteiner ved å sende dem gjennom en kolonne som f.eks:
- affinitetskromatografi
- ionebytter kromatografi
- gel filtrering kromatofgrafi

Question 9

2. celle fraksjonering

Answer 9

skille proteinene etter tetthet
- sentrifugering
- lav tetthet på topp, høy tetthet på bunn

Question 10

affinitetskromotografi

Answer 10

renne proteiner gjennom kolonne med bestemt materiale på innsiden
- proteinene vil reagere forskjellig på materiale inne i cellen som separerer de

Question 11

ionebytter kromatografi

Answer 11

separering basert på ladning
kolonnematerialet sin ladning blir basert på ladningen til proteinene vi ønsker å separere

Question 12

gel filtration kromatografi

Answer 12

separerer etter størrelse
- beads med porer
- største proteiner kommer ut først

Question 13

antistoffer

Answer 13

har to bindingsseter for antigen
- kan gjenkjenne spesifikke antigener
- blir produsert av B-celler/type hvite blodceller

Question 14

antigen

Answer 14

ukjent molekyl, bakterie/virus

Question 15

western blotting

Answer 15

proteinananlyse metode ved bruk av antistoffer
1. separering av prøven (SDS-PAGE)
2. overføring til membran med antistoffer
3. gjenkjenning og binding av antistoffer til proteiner

Question 16

massespektometri

Answer 16

analysemetode som måler forholdet mellom masse og ladning til molekylet

Question 17

ELISA

Answer 17

påvisning av ulike diagnoser ved måling av hvor mye antistoff vi har i kroppen for ulike diagnoser
- antistoff er bundet til enzym som utløser fargestoff ved binding til riktig antigen
- konsentrasjonen av antistoff bundet kan vises med intensiteten til fargen

Question 18

hurtigtest

Answer 18

I testen blander vi prøve fra menneske med prøve fra test (f.eks nitrocellulose).
det vil da være to forskjellige antistoffer:
- 1 binder antigen (fra menneske) for test linjen
- 1 binder ikke antigen, men nitrocellulose for kontrollinje