Molekylærbiologi Flashcards
vi kan bruke bakterier som ecoli til å klone spesifikke gener ved å:
- bruke restriksjonsenzymer til å kutte ut det bestemte genet vi ønsker fra en DNA sekvens
- legge til genet i et plasmid ved hjelp av DNA ligase
- så settes plasmidet inn i en bakterie
restriksjonsenzymer i bakterieceller
oppstår naturlig som en måte å beskytte bakteriet fra fremmed DNA f.eks fra virus ved å bryte ned DNAet
rekombinant DNA
kombinering av DNA sekvenser fra ulike kilder som modifiserer genet. blir dannet et kunstig DNA
hva trengs for å danne et cDNA-molekyl i en bakteriecelle?
vi trenger et ferdig modifisert modent mRNA fra en eukaryot celle
første steg i cDNA syntese/RT-PCR:
mRNA-molekylet med geninformasjonen vi ønsker vil gjennom enzymet revers transkriptase syntensere et korresponderende DNA-molekyl
andre steg i cDNA syntese/RT-PCR:
den nye korresponderende DNA-tråden vil separeres fra mRNA-tråden
DNA polymerase vil nå danne en komplementær tråd til DNA-tråden for å danne et dobbeltrådet DNA-molekyl (cDNA)
hva skjer med den nylig syntenserte cDNA-molekylet?
ved hjelp av en vektor kan molekylet bli satt i en bakteriecelle for å bli klonet.
primer brukt i første sted av cDNA syntese/RT-PCR:
oligi(dT)
- stabiliserer mRNA
Sanger DNA-sekvensering
metode å finne ut sekvensen på DNA
- gir oss geninformasjon, genutrykk og hvilke proteiner som dannes
hvordan skjer oppkuttingen av genet fra DNA-kjeden før den blir satt i plasmid?
ved hydrolyse blir fosfodiesterbindingen brutt
må være en palindromisk sekvens
- leses lik fra 5’ til 3’ enden som fra 3’ til 5’ enden
PCR (polymerase chain reaction)
ved PCR kan vi kopiere millionvis av kopier av DNA-sekvenser uten å bruke bakterier
hvilke 4 ting er nødvendig for å gjøre PCR?
- produkt, DNA sekvens som skal replikeres
- et par med DNA-primere
- varmeresistant DNA polymerase
- alle fire nukleotidene (dntp) som byggeblokker
- adenin, guanin, tymin og cytosin
første steg av PCR:
(temperatur)
temperatur hevet til 94 grader slik at DNA-trådene kan denatureres og bli tatt fra hverandre
temperaturen vil så bli tatt ned til 54 grader så DNA primerne kan binde seg til trådene og hindre dem fra å gå sammen igjen
andre steg av PCR:
etter DNA primerne er bundet blir temperaturen hevet til 72 grader så DNA polymerasen kan begynne og sette på korresponderende nukleotider
flanking sekvens
deler på DNA tråden som ikke er med i genet ved PCR
- sekvens hvor primerne og DNA polymerase vil binde seg