Molekylærbiologi

Question 1

vi kan bruke bakterier som ecoli til å klone spesifikke gener ved å:

Answer 1

1. bruke restriksjonsenzymer til å kutte ut det bestemte genet vi ønsker fra en DNA sekvens
2. legge til genet i et plasmid ved hjelp av DNA ligase
3. så settes plasmidet inn i en bakterie

Question 2

restriksjonsenzymer i bakterieceller

Answer 2

oppstår naturlig som en måte å beskytte bakteriet fra fremmed DNA f.eks fra virus ved å bryte ned DNAet

Question 3

rekombinant DNA

Answer 3

kombinering av DNA sekvenser fra ulike kilder som modifiserer genet. blir dannet et kunstig DNA

Question 4

hva trengs for å danne et cDNA-molekyl i en bakteriecelle?

Answer 4

vi trenger et ferdig modifisert modent mRNA fra en eukaryot celle

Question 5

første steg i cDNA syntese/RT-PCR:

Answer 5

mRNA-molekylet med geninformasjonen vi ønsker vil gjennom enzymet revers transkriptase syntensere et korresponderende DNA-molekyl

Question 6

andre steg i cDNA syntese/RT-PCR:

Answer 6

den nye korresponderende DNA-tråden vil separeres fra mRNA-tråden
DNA polymerase vil nå danne en komplementær tråd til DNA-tråden for å danne et dobbeltrådet DNA-molekyl (cDNA)

Question 7

hva skjer med den nylig syntenserte cDNA-molekylet?

Answer 7

ved hjelp av en vektor kan molekylet bli satt i en bakteriecelle for å bli klonet.

Question 8

primer brukt i første sted av cDNA syntese/RT-PCR:

Answer 8

oligi(dT)
- stabiliserer mRNA

Question 9

Sanger DNA-sekvensering

Answer 9

metode å finne ut sekvensen på DNA
- gir oss geninformasjon, genutrykk og hvilke proteiner som dannes

Question 10

hvordan skjer oppkuttingen av genet fra DNA-kjeden før den blir satt i plasmid?

Answer 10

ved hydrolyse blir fosfodiesterbindingen brutt
må være en palindromisk sekvens
- leses lik fra 5’ til 3’ enden som fra 3’ til 5’ enden

Question 11

PCR (polymerase chain reaction)

Answer 11

ved PCR kan vi kopiere millionvis av kopier av DNA-sekvenser uten å bruke bakterier

Question 12

hvilke 4 ting er nødvendig for å gjøre PCR?

Answer 12

1. produkt, DNA sekvens som skal replikeres
2. et par med DNA-primere
3. varmeresistant DNA polymerase
4. alle fire nukleotidene (dntp) som byggeblokker
   - adenin, guanin, tymin og cytosin

Question 13

første steg av PCR:
(temperatur)

Answer 13

temperatur hevet til 94 grader slik at DNA-trådene kan denatureres og bli tatt fra hverandre
temperaturen vil så bli tatt ned til 54 grader så DNA primerne kan binde seg til trådene og hindre dem fra å gå sammen igjen

Question 14

andre steg av PCR:

Answer 14

etter DNA primerne er bundet blir temperaturen hevet til 72 grader så DNA polymerasen kan begynne og sette på korresponderende nukleotider

Question 15

flanking sekvens

Answer 15

deler på DNA tråden som ikke er med i genet ved PCR
- sekvens hvor primerne og DNA polymerase vil binde seg

Question 16

DNA microarray

Answer 16

analyse metode for å finne ut hvilke gener og proteiner som aktivt blir utrykt på bestemt tidspunkt

Question 17

site directed mutagenese

Answer 17

PCR basert analyse metode hvor man kan endre på spesifikke aminosyrer
dette danner små mutasjoner og kan fortelle oss hvor viktige de forskjellige aminosyrene er for proteinet

Question 18

CRISPR

Answer 18

genteknologisk metode å endre å manipulerere DNA og gener