Principer för rekombinant DNA-teknik & introduktion till DNA-sekvensering Flashcards
1
Q
DNA - kloning
A
- Att skapa identiska kopior av ett DNA (Eller en gen).
- Detta sker genom att sätta in den i bäraremolekyl som sedan får kopieras av en värdorganism (Bakterie).
2
Q
Ett annat namn för plasmid
A
- Kloningsvektor.
- Expressionsvektor.
3
Q
DNA ligase / Restrektionsenzymer
A
- DNA ligase: Är det enzym som binder DNA fragment med plasmiden. De är ospecifika
- Restriktionsenzymer: Är det enzym som klipper DNA-sekvenser. De är specifika.
4
Q
Vad har rekombinant DNA-teknik som syfte?
A
- Låta bakterien kopiera plasmider för att få fler plasmider.
- Låta bakterien uttrycka protein från genom.
- När man kombinerar de ovanstående punkter, får man fler plasmider vilket resulterar fler protein.
5
Q
DNA-sekvenserings syfte
A
- Studera skillnader i DNA:t som hör ihop med en sjukdom.
- Studera ett visst gen.
- Brottplats.
- Kartlägga hela humana genomet.
- Studera LM:S effekt på olika gener.
6
Q
Kedjeterminering (Sanger sekvensering)
A
- En metod som används för att sekvensera korta bitar av DNA.
- En enkelsträngad DNA som mall –> DNA-polymeras bygger på nukleotider i en komp. kedja
- Man använder även “Dideoxynukleotider”, en slags flaska nukleotider som stoppar fortsatt DNA-syntes.
- Slumpvis insättning av vanliga och Dideoxynukleotider ger olika långa DNA-molekyler som alla har Dideoxynukleotid i ända.
- Dideoxynukleotider är märkta med olika fluorerserande färg (Separeras efter storlek).
7
Q
Dideoxynukleotid
A
- Vi har H istället för OH i 3’-positionen, detta gör att vi inte kan bygga vidare.
8
Q
Ett problem med kedjetermenering är ….
A
- Att DNA-polymeras inte vet om den ska sätta vanliga eller dideoxynukleotider, det blir därför slumpvis.
9
Q
Hur separeras DNA-molekyler med kedjetermenering?
A
- DNA med olika längder kan separeras med kapillär elektrofores.
