Preparação de amostras histológicas Flashcards
Ordene os seguintes processos necessários para a preparação de amostras.
A. Fixação dos tecidos
B. Coloração
C. Recolha de bioespécimes
D. Corte e transferência para cassetes
E. Processamento dos tecidos
F. Seccionamento
C - A - D - E - F - B
Durante a fase da recolha dos bioespécimes, não se deve recorrer a técnicas de suporte, como a endoscopia, a MRI, a CT ou a ultrassons, por exemplo. Verdadeiro ou Falso?
Falso
O labelling das amostras faz-se durante a fase de fixação dos tecidos. Verdadeiro ou Falso?
Falso
Que informações é que o labelling das amostras deve incluir?
- Patient ID
- Where and when it was collected
- Tipo de amostra
- Teste requerido
- Conselhos especiais a ter com a amostra
- Avisos para amostras de alto risco
Se a fixação dos tecidos provocar alterações na coloração, pode concluir-se que houve a danificação da amostra. Verdadeiro ou Falso?
Falso
A fixação dos tecidos previne a ___________ e a putrefação, protege contra ______________, ______________ moléculas que se podem perder, previne mudanças na morfologia dos tecidos e ____________ os tecidos para facilitar o corte.
autólise; microorganismos; imobiliza; endurece
Na fixação química, quanto maior for a taxa de difusão do agente fixador, maior é o tempo necessário à fixação. Verdadeiro ou Falso?
Falso
Os agentes fixadores, na fixação química, devem ter uma baixa taxa de fixação. Verdadeiro ou Falso?
Falso
As propriedades de osmose e de pH dos agentes fixadores são irrelevantes no seu processo de escolha. Verdadeiro ou Falso?
Falso. As propriedades de osmose e de pH devem ser semelhantes às dos tecidos a fixar.
Temperaturas mais __________ diminuem o tempo de fixação dos tecidos.
elevadas
O que é o efeito de Mordant?
O efeito de Mordant diz que alguns agentes fixadores podem alterar os tecidos e aumentar a sua afinidade para alguns corantes, de forma a facilitar a análise.
Quais são os 5 principais grupos de agentes fixadores na fixação química (geralmente, usa-se formalina ou glutaraldeído)?
- Aldeídos
- Mercúrios
- Alcoóis
- Agentes oxidantes
- Picratos
Quanto mais formalina for usada na fixação, maior será o tempo de fixação dos tecidos. Verdadeiro ou Falso?
Falso
Geralmente, usa-se 10 mL de formalina para 1 cm^3 de tecido, sendo, nestas condições, o tempo de fixação de cerca de 24-48 horas. Verdadeiro ou Falso?
Verdadeiro
Quais são as duas formas de realizar a fixação química dos tecidos?
- Imersão
- Perfusão (the fixative is introduced through the vascular system of the tissue)
Quais são as 3 principais formas de fixação física dos tecidos?
- Congelamento rápido ou vitrificação: arrefecimento rápido após pré-tratamento dos tecidos com crioprotetor (glicol).
- Liofilização: remove-se água por sublimação, prevenindo a ocorrência de reações químicas durante a fase líquida da água.
- Fixação por aquecimento: aplicada na fixação de microorganismos, especialmente, porque o calor excessivo provoca a desnaturação das proteínas e dissolve os lípidos. Tipicamente, ocorre através de microondas após uma reação química.
Na fase de corte e de transferência para cassetes, os espécimes são cortados (4 mm) e armazenados em ____________. As secções devem ser _______________ da amostra e devem seguir marcas de referência.
formalina; representativas
Ao transferir as amostras para cassetes, estas não precisam de ser identficadas de novo. Verdadeiro ou Falso?
Falso
Dê exemplos de métodos/substâncias usadas para fazer a descalcificação de estruturas mais rígidas durante a fase de corte e de transferência das amostras biológicas para cassetes.
- Ácidos minerais fortes (HCl)
- Ácidos orgânicos fracos (ácido fórmico)
- Agentes quelantes (EDTA)
Para que serve o processamento dos tecidos?
A fixação dos tecidos não os endurece o suficiente para que ocorra seccionamento com a espessura desejada (20-30 micrómetros).
O processamento dos tecidos pode ser feito através de 2 métodos. Quais são?
- Congelamento: dezenas de nanómetros até 50 micrómetros; é relevante usar crioprotetores, evitando danos nos tecidos e formação de cristais de água.
- Embedding / Incorporação (mais comum): dezenas de nanómetros até dezenas de micrómetros; requere a infiltração de substâncias nas amostras que não provoquem alterações nas propriedades das amostras. Normalmente, usa-se parafina para análises com o mircroscópio ótico e epoxy e resinas acrílicas para análise com microscopia de eletrões.
Geralmente, o meio de incorporação é ______________, pelo que antes da incorporação de parafina, é preciso substituir gradualmente o teor em água por compostos _____________. Começa-se, então, pela desidratação (onde se vai substituindo a água por _____________), depois faz-se o clearing (substituição do álcool por um solvente miscível com ____________) e, no fim, há a incorporação (embedding) em cera de parafina.
hidrofílico; hidrofóbicos; álcool; parafina
Na fase de seccionamento, as amostras são cortadas e colocadas em lâminas. Primeiro, faz-se a remoção da _________ de parafina e arrefecimento. Depois, as fitas de tecido são mergulhadas num banho ___________ e, no fim, dá-se a ____________ da lâmina (noite: 37 ºC e incubadora 1h–>60º C).
cera; quente; secagem
Alguns métodos de coloração requerem a rehidratação da amostra. Porquê?
Isto, por vezes, é necessário porque alguns corantes dão miscíveis em água. Portanto, repete-se o processo de embedding (processamento de tecidos), mas no sentido inverso (xilol –> etanol –> água).
Os corantes mais comuns são a hematoxilina, que é um ácido, e a eosina, base - (H&E). Verdadeiro ou Falso?
Verdadeiro
Após a coloração, é colocada uma lamela sobre a lâmina para proteção. Verdadeiro ou Falso?
Verdadeiro
