Preparação de amostras histológicas

Question 1

Ordene os seguintes processos necessários para a preparação de amostras.

A. Fixação dos tecidos
B. Coloração
C. Recolha de bioespécimes
D. Corte e transferência para cassetes
E. Processamento dos tecidos
F. Seccionamento

Answer 1

C - A - D - E - F - B

Question 2

Durante a fase da recolha dos bioespécimes, não se deve recorrer a técnicas de suporte, como a endoscopia, a MRI, a CT ou a ultrassons, por exemplo. Verdadeiro ou Falso?

Answer 2

Falso

Question 3

O labelling das amostras faz-se durante a fase de fixação dos tecidos. Verdadeiro ou Falso?

Answer 3

Falso

Question 4

Que informações é que o labelling das amostras deve incluir?

Answer 4

1. Patient ID
2. Where and when it was collected
3. Tipo de amostra
4. Teste requerido
5. Conselhos especiais a ter com a amostra
6. Avisos para amostras de alto risco

Question 4

Se a fixação dos tecidos provocar alterações na coloração, pode concluir-se que houve a danificação da amostra. Verdadeiro ou Falso?

Answer 4

Falso

Question 4

A fixação dos tecidos previne a ___________ e a putrefação, protege contra ______________, ______________ moléculas que se podem perder, previne mudanças na morfologia dos tecidos e ____________ os tecidos para facilitar o corte.

Answer 4

autólise; microorganismos; imobiliza; endurece

Question 5

Na fixação química, quanto maior for a taxa de difusão do agente fixador, maior é o tempo necessário à fixação. Verdadeiro ou Falso?

Answer 5

Falso

Question 6

Os agentes fixadores, na fixação química, devem ter uma baixa taxa de fixação. Verdadeiro ou Falso?

Answer 6

Falso

Question 7

As propriedades de osmose e de pH dos agentes fixadores são irrelevantes no seu processo de escolha. Verdadeiro ou Falso?

Answer 7

Falso. As propriedades de osmose e de pH devem ser semelhantes às dos tecidos a fixar.

Question 8

Temperaturas mais __________ diminuem o tempo de fixação dos tecidos.

Answer 8

elevadas

Question 9

O que é o efeito de Mordant?

Answer 9

O efeito de Mordant diz que alguns agentes fixadores podem alterar os tecidos e aumentar a sua afinidade para alguns corantes, de forma a facilitar a análise.

Question 10

Quais são os 5 principais grupos de agentes fixadores na fixação química (geralmente, usa-se formalina ou glutaraldeído)?

Answer 10

1. Aldeídos
2. Mercúrios
3. Alcoóis
4. Agentes oxidantes
5. Picratos

Question 11

Quanto mais formalina for usada na fixação, maior será o tempo de fixação dos tecidos. Verdadeiro ou Falso?

Answer 11

Falso

Question 12

Geralmente, usa-se 10 mL de formalina para 1 cm^3 de tecido, sendo, nestas condições, o tempo de fixação de cerca de 24-48 horas. Verdadeiro ou Falso?

Answer 12

Verdadeiro

Question 13

Quais são as duas formas de realizar a fixação química dos tecidos?

Answer 13

• Imersão
• Perfusão (the fixative is introduced through the vascular system of the tissue)

Question 14

Quais são as 3 principais formas de fixação física dos tecidos?

Answer 14

• Congelamento rápido ou vitrificação: arrefecimento rápido após pré-tratamento dos tecidos com crioprotetor (glicol).
• Liofilização: remove-se água por sublimação, prevenindo a ocorrência de reações químicas durante a fase líquida da água.
• Fixação por aquecimento: aplicada na fixação de microorganismos, especialmente, porque o calor excessivo provoca a desnaturação das proteínas e dissolve os lípidos. Tipicamente, ocorre através de microondas após uma reação química.

Question 15

Na fase de corte e de transferência para cassetes, os espécimes são cortados (4 mm) e armazenados em ____________. As secções devem ser _______________ da amostra e devem seguir marcas de referência.

Answer 15

formalina; representativas

Question 16

Ao transferir as amostras para cassetes, estas não precisam de ser identficadas de novo. Verdadeiro ou Falso?

Answer 16

Falso

Question 17

Dê exemplos de métodos/substâncias usadas para fazer a descalcificação de estruturas mais rígidas durante a fase de corte e de transferência das amostras biológicas para cassetes.

Answer 17

• Ácidos minerais fortes (HCl)
• Ácidos orgânicos fracos (ácido fórmico)
• Agentes quelantes (EDTA)

Question 18

Para que serve o processamento dos tecidos?

Answer 18

A fixação dos tecidos não os endurece o suficiente para que ocorra seccionamento com a espessura desejada (20-30 micrómetros).

Question 19

O processamento dos tecidos pode ser feito através de 2 métodos. Quais são?

Answer 19

1. Congelamento: dezenas de nanómetros até 50 micrómetros; é relevante usar crioprotetores, evitando danos nos tecidos e formação de cristais de água.
2. Embedding / Incorporação (mais comum): dezenas de nanómetros até dezenas de micrómetros; requere a infiltração de substâncias nas amostras que não provoquem alterações nas propriedades das amostras. Normalmente, usa-se parafina para análises com o mircroscópio ótico e epoxy e resinas acrílicas para análise com microscopia de eletrões.

Question 20

Geralmente, o meio de incorporação é ______________, pelo que antes da incorporação de parafina, é preciso substituir gradualmente o teor em água por compostos _____________. Começa-se, então, pela desidratação (onde se vai substituindo a água por _____________), depois faz-se o clearing (substituição do álcool por um solvente miscível com ____________) e, no fim, há a incorporação (embedding) em cera de parafina.

Answer 20

hidrofílico; hidrofóbicos; álcool; parafina

Question 21

Na fase de seccionamento, as amostras são cortadas e colocadas em lâminas. Primeiro, faz-se a remoção da _________ de parafina e arrefecimento. Depois, as fitas de tecido são mergulhadas num banho ___________ e, no fim, dá-se a ____________ da lâmina (noite: 37 ºC e incubadora 1h–>60º C).

Answer 21

cera; quente; secagem

Question 22

Alguns métodos de coloração requerem a rehidratação da amostra. Porquê?

Answer 22

Isto, por vezes, é necessário porque alguns corantes dão miscíveis em água. Portanto, repete-se o processo de embedding (processamento de tecidos), mas no sentido inverso (xilol –> etanol –> água).

Question 23

Os corantes mais comuns são a hematoxilina, que é um ácido, e a eosina, base - (H&E). Verdadeiro ou Falso?

Answer 23

Verdadeiro

Question 24

Após a coloração, é colocada uma lamela sobre a lâmina para proteção. Verdadeiro ou Falso?

Answer 24

Verdadeiro