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Histology and Clinical Biochemistry > Clinical Biochemistry - Analytical methods > Flashcards

Clinical Biochemistry - Analytical methods Flashcards

1
Q

Na técnicas de espetroscopia, por que ordem aparecem as/os seguintes estruturas/intrumentos?

A) Detetor
B) Setor de comprimento de onda
C) Monocromador
D) Colimador
E) Fonte de luz
F) Amostra

A

E - D - C - B- F - A

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2
Q

Enuncie a Lei de Beer-Lambert.

A

A concentração de uma substância é diretamente proporcional à quantidade de luz absorvida a um certo comprimento de onda.

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3
Q

Quais são os objetivos da espetroscopia?

A

1) Determinar a concentração de um analito numa amostra.

2) Detetar impurezas.

3) Elucidar sobre a estrutura de compostos orgânicos.

4) Estudar a cinética (alterações das concentrações ao longo do tempo).

5) Detetar grupos funcionais e aceder ao peso molecular de uma substância.

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4
Q

A espetroscopia UV-Vis usa fontes de luz com comprimentos de onda entre __________ nm (grandes energias). Antes da análise, é necessário escolher o __________ adequado, de forma a que este não interfira com o espetro de absorção (para radiação UV, normalmente, usam-se cuvettes de _______). É importante também escolher o comprimento de onda de medida ou o intervalo de comprimentos de onda (para determinar o ______ ________ de absorção).

A

190-900; cuvette; quartzo; pico preferencial

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5
Q

Em testes de colorimetria, o tamanho das amostras e as suas alterações conformacionais podem causar alterações de cor. Verdadeiro ou Falso?

A

Verdadeiro

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6
Q

A colorimetria não pode ser um método quantitativo. Verdadeiro ou Falso?

A

Falso. Pode tornar-se quantitativa se for combinada com uma técnica de espetrofotometria.

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7
Q

A colorimetria permite aferir sobre alterações __________ e medir a concentração de analitos a um certo comprimento de onda.

A

conformacionais

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8
Q

A colorimetria permite aferir sobre a cinética das amostras em análise. Verdadeiro ou Falso?

A

Falso

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9
Q

A Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIS) usa fontes de luz com comprimentos de onda entre __________ nm (baixas energias, tal como o nome diz). As amostras podem ser ________ ou líquidas e esta técnica permire obter informação sobre a estrutura molecular, baseando-se na deteção de _________ atómicas.

A

1400-28000; sólidas; ligações

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10
Q

A espetroscopia de massa (MS) baseia-se na medida da razão massa-carga de cada analito através da sua ionização com feixes de eletrões. Verdadeiro ou Falso?

A

Verdadeiro

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11
Q

Em MS, os fragmentos são defletidos e separados de acordo com a sua razão massa-carga. Verdadeiro ou Falso?

A

Verdadeiro

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12
Q

A técnica de NMRS é pouco sensível. Verdadeiro ou Falso?

A

Falso

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13
Q

A técnica de Flow Cytometry baseia-se em fazer passar a amostra através de um feixe laser e a luz dispersa vai ser detetada e é caraterística de cada componente e tipo. Verdadeiro ou Falso?

A

Verdadeiro

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14
Q

Com a técnica de Flow Citometry, pode fazer a contagem de ________, a deteção de biomarcadores e a medida do tamanho do _________.

A

células; genoma

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15
Q

Na flow citometry, não é possível detetar-se fases do ciclo celular. Verdadeiro ou Falso?

A

Falso

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16
Q

A flow citometry, é preciso fazer-se a ___________ das amostras e esta é uma técnico muito ___________ e complexa.

A

coloração; específica

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17
Q

Na FACs, a separação das componentes é feita com base no uso de anticorpos altamente específicos marcados com corantes ___________ para distinguir entre tipos de células.

A

fluorescentes

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18
Q

A FACs permite fazer a separação com base em que caraterísticas das amostras?

A
  • Tamanho;
  • Granularidade;
  • Expressão de citocinas.

(…)

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19
Q

As técnicas de cromatografia envolvem o uso de uma fase _______ (eluente) e de uma fase estacionária (fluido que enche o sistema analítico).

A

móvel

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20
Q

Na TLC (Thin-Layer Chromatography), a migração ocorre em placas de ______ ou em folhas de plástico com uma camada _____ de ________ finamente moído (sílica gel ou alumínio).

A

vidro; fina; adsorvente

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21
Q

Um elevado fator de retenção (Rf) é indicativo do quê?

A

Significa que um composto migrou uma grande distância na placa e é pouco polar.

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22
Q

Um baixo fator de retenção (Rf) é indicativo do quê?

A

Significa que um composto migrou uma pequena distância na placa e é muito polar.

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23
Q

Na TLC, torna-se possível excluir a hipótese de contaminação das amostras. Verdadeiro ou Falso?

A

Verdadeiro

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24
Q

Na técnica de SEC (Size-Exclusion Chromatography), as moléculas grandes (ou seja, que são _________ do que os buracos da matriz porosa) migram ____________ através da coluna. Já as pequenas (_________ que os buracos da matriz) equilibram-se com os líquidos interno e externo, migrando ___________ e emergindo do volume do _________.

A

maiores; rapidamente; menores; devagar; eluente

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25
Q

Na técnica de IEC (Ion-Exchange Chromatography), há a separação de iões e de moléculas polares ionizáveis através da sua afinidade para o _____ _________.

A

ion exchanger

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26
Q

Na IEC, a fase __________ é uma matriz fixa que contém grupos funcionais ionizáveis carregados que interagem com analitos de carga _______. Os analitos que não interagirem com a matriz ou que interagirem mais ___________ são os _________ a serem transportados. É, no entanto, preciso tomar atenção ao ponto isoelétrico do analito em estudo.

A

estacionária; oposta; fracamente; primeiros

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27
Q

A High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) envolve uma fase ______ que é bombeada por uma coluna que contém partículas porosas com uma segunda fase (______________) ligada à sua superfície. As diferentes ____________ das componentes da amostra nas duas fases fazem com que se movam a velocidades ____________ através da coluna. No fim, os componentes são detetados por espetroscopia de absorção.

A

móvel; estacionária; solubilidades; diferentes

28
Q

Na HPLC, podemos ter uma fase normal, onde a coluna é ________ (sílica, p.e) e a fase móvel é ___________ (chloroform, p.e). É mais usada para elementos ‘water-sensitive’.

A

polar; não-polar

29
Q

Na HPLC, podemos ter uma fase reversa, onde a coluna é _________ e a fase móvel é ___________. É a mais _________.

A

não-polar; polar; comum

30
Q

Bolhas de ar no circuito dos analitos não são relevantes para o bom funcionamento da técnica de HPLC. Verdadeiro ou Falso?

A

Falso

31
Q

A eletroforese consiste na migração de solutos ___________ num meio líquido (eletrólito) sob a influência de um ___________ ___________ aplicado. Existem 1 ________ e 1 cátodo e a separação resulta das diferentes __________ dos analitos (produto da mobilidade das partículas pela intensidade do _________ _________).

A

carregados; campo elétrico; ânodo; velocidades; campo elétrico

32
Q

A eletroforese é usada para separação de DNA, RNA ou polipéptidos baseando-se no seu tamanho e carga elétrica. Moléculas mais _________ movem-se mais rápido e migram mais longe através dos _______ do ______ do que as moléculas ___________:

A

pequenas; poros; gel; grandes

33
Q

Quais são os 2 tipos de testes bioquímicos analíticos que podem ser feitos?

A
  1. Moleculares: amplificam o material genético viral e amplificam o sinal. Detetam sequências de ácidos nucleicos, associados a agentes patogénicos ou marcadores genéticos.
  2. Serológicos (ou imunológicos): detetam anticorpos que se ligam a antigénios virais. Detetam-se anticorpos ou antigénios no sangue do paciente (ou noutro bioespécime).
34
Q

Os testes serológicos permitem 3 grandes coisas. Quais são?

A
  1. Detetar anticorpos produzidos pelo sistema imunitário em resposta a uma infeção causada por um agente patogénico.
  2. Compreender a resposta imunitária após vacinação ou determinar possível exposição ao agente agressor.
  3. Deteção de anticorpos produzidos pelo sistema imunitário numa doença auotimune.
35
Q

Os testes serológicos incluem…

A
  1. Testes de diagnóstico rápido (RDTs)
  2. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
  3. Fluorescent immunoassays (FIA)
  4. Chemiluminescent immunoassays (CLIA)
  5. Western blot
  6. Testes de neutralização
  7. Testes de aglutinação
36
Q

Os testes moleculares permitem 3 grandes coisas. Quais são?

A
  1. Detetam a presença de vírus, bactérias, fungos ou parasitas através dos seus ácidos nucleicos (diagnóstico rápido e de elevada sensibilidade).
  2. Identificam mutações genéticas, variações ou padrões de exposição génicas (podem estar associadas a determinadas doenças).
  3. Dão informação sobre a composição genética, fatores de virulência e de resistência à medicação.
37
Q

Os testes moleculares incluem…

A
  1. Polymerase Chain Reaction (PCR)
  2. Reverse Transcription PCR (RT-PCR)
  3. Sequenciação de ácidos nucleicos
38
Q

Qual é o princípio de deteção dos testes serológicos? E o dos testes moleculares?

A

Serológicos: respostas imunológicas (interação anticorpo-antigénio).

Moleculares: Amplificação ou deteção de ácidos nucleicos.

39
Q

Os testes moleculares permitem fazer a deteção de atuais ou recentes infeções ou respostas imunitárias. Verdadeiro ou Falso?

A

Falso. Os serológicos permitem isso. Os testes moleculares apenas permitem detetar infeções atuais ou condições genéticas.

40
Q

Ambos os tipos de testes bioquímicos (serológicos e moleculares) têm elevada sensibilidade. No entanto, um deles tem ambos os parâmetros maiores. Qual é?

A

Os testes moleculares.

41
Q

Nos testes serológicos, quais são as fases do processo de deteção de anticorpos?

A

1 - Seleção do anticorpo/antigénio de deteção
2 - Imobilização do antigénio/anticorpo em microplacas
3 - Inoculação da amostra na microplaca (possibilitando a ligação entre os antigénios, se presentes, e os anticorpos da amostra)
4 - Lavagem da microplaca (remoção dos componentes não ligados)
5 - Deteção dos complexos antigénio-anticorpo, com ELISA, FIA e CLIA
6 - Medição do sinal para quantificação do anticorpo

42
Q

Os RDTs podem gerar resultados em __________, usam tecnologia de ________ (como os testes de covid e de gravidez) e são muito usados em diagnóstico de doenças infecciosas (HIV, malária, infeções do trato urinário).

A

minutos; fluxo

43
Q

Na ELISA, os anticorpos estão ligados a _________ para deteção de ____________ na amostra. Tem elevada sensibilidade e especificidade.

A

enzimas; antigénios

44
Q

A ELISA é usada para diagnosticar doenças como a doença de _______, hepatite e alguns tipos de __________.

A

Lyme; cancro

45
Q

Faça as correspondências corretas.

  1. ELISA Direta
  2. ELISA Indireta
  3. Sandwich ELISA
  4. Competitive ELISA

A. Existem anticorpos específicos para a molécula de interesse nos copos e são adicionados antigénios ligados a complexos enzima-anticorpos de competição. Se houver mais ligações entre o anticorpo do copo e o complexo de competição, quer dizer que a molécula de interesse está pouco presente e mais escura estará a amostra.

B. A molécula de interesse é diretamente imobilizada numa microplaca e liga-se diretamente ao um complexo enzima-anticorpo. É simples e rápido mas tem sensibilidade limitada.

C. Já existem anticorpos específicos para um epítopo no copo. Junta-se a molécula de interesse. Depois, entra o complexo enzima-anticorpo secundário. Tem uma especificidade e uma sensibilidade elevadas.

D. É semelhante ao método direto mas, neste caso, a enzima está ligada a um anticorpo secundário (menos específico —> mais barato). Junta-se um anticorpo primário específico e apenas depois o complexo. Permite que haja amplificação do sinal e apresenta elevada sensibilidade e é um método mais complexo, no entanto, mais flexível.

A

1 - B
2 - D
3 - C
4 - A

46
Q

Quais são as fases básicas do processo de ELISA?

A
  1. Imobilização da molécula de captura.
  2. Inoculação da amostra.
  3. Diluição dos anticorpos de deteção.
  4. Adição de anticorpos marcados com enzimas (ligam-se a anticorpos primários).
  5. Adição de um substrato para catalizar enzimas após diluição e lavagem (retirar moléculas não ligadas).
  6. Análise com espetrofotómetros, fluoróforos ou leitores de microplacas.
47
Q

Nas FIAs, os anticorpos são marcados com ______________ para deteção de antigénios na amostra. Tem elevada sensibilidade e especificidade. É usado para diagnóstico de doenças infeciosas, deteção de proteínas específicas e doenças autoimunes.

A

fluorescência

48
Q

Nas CLIA, os anticorpos têm marcação _____________ para deteção de antigénios. A quantificação faz-se com base na _____ emitida na sequência de reações químicas. Oferece uma análise ___________ de elevada sensibilidade. É usado em diagnóstico de doenças infecciosas, testes ___________ e deteção de marcadores tumorais.

A

quimiluminescente; luz; quantitativa; hormonais

49
Q

Compare os métodos de ELISA e de CLIA.

A

ELISA - métodos de deteção colorimétricos ou fluorescentes; elevada sensibilidade e mais barato.

CLIA - métodos de deteção com uso de PTM e/ou de câmeras de carga acopladas; melhor sensibilidade e mais cara.

50
Q

O western blot é usado para detetar proteínas (presença, __________ e quantidade). Tem um sensibilidade média e, geralmente, oferece uma análise quantitativa.

A

tamanho

51
Q

Quais são as fases que constituem o processo de western blot?

A
  1. Separação de proteínas (eletroforese) - PAGE
  2. Transferência para uma membrana (nitrocelulose, p.e)
  3. Staining (recorre-se a anticorpos primários e secundários marcados com enzimas, p.e)
  4. Gera-se o sinal para deteção em filmes radiográficos ou quimiluminescentes.
52
Q

Os testes de neutralização avaliam a capacidade de uma molécula (agente neutralizador) afetar a atividade biológica de uma molécula alvo. A análise da atividade biológica pode ser estudada com base na viabilidade celular, citotoxicidade, replicação viral, atividade enzimática, etc. Geralmente, são usados para testar a ___________ de ___________ na prevenção de infeções ________, por exemplo.

A

viabilidade; anticorpos; virais

53
Q

Os testes de aglutinação baseiam-se na aglutinação de células/bactérias/… na presença de determinados anticorpos/antigénios. Isto é, a ligação de anticorpos aos ____________ presentes nas superfícies destas partículas leva à formação de agregados que são facilmente ____________. São testes rápidos e simples e oferecem análises ___________ e semi-____________.

A

antigénios; observáveis; qualitativas; quantitativas

54
Q

Quais são os tipos de testes de aglutinação mais comuns?

A
  1. Hemo-aglutinação: usado para testar o tipo de sangue e diagnosticar certas doenças infecciosas.
  2. Aglutinação de partículas: latex ou células microbiais são revestidas com antigénios e anticorpos. Quando estão na presença de amostras com antigénios e anticorpos, agregam-se. Usados para detetar anticorpos contra agentes patogénicos e doenças autoimunes.
  3. Aglutinação em lâmina: uma gota da amostra do paciente reage com um reagente específico presente na lâmina. Se o antigénio/anticorpo alvo estiver presente, ocorre aglutinação. É útil para identificar infeções bacterianas.
55
Q

A PCR baseia-se na amplificação de segmentos específicos do DNA, recorrendo à replicação enzimática deste. A DNA ____________ sintetiza novas cadeias de DNA seguindo um _________ (é necessário porque esta enzima só consegue adicionar um _____________ na extremidade ___’ da cadeia). Usada para sequenciação de DNA, análise de __________ génica, testes _____________, análises forenses e diagnóstico de doenças infecciosas.

A

Polimerase; primer; nucleótido; 3; Polimerase; expressão; genéticos

56
Q

Quais são as 3 fases da PCR?

A
  1. Desnaturação: separação da cadeias de DNA (altas temperaturas).
  2. Annealing: os primers (DNA or RNA single-stranded sequences of 20-30 bases) ligam-se às cadeias de DNA já separadas.
  3. Elongation: a temperatura volta a subir e as bases são adicionadas à extremidade 3´pela DNA Polimerase.
57
Q

A RT-PCR permite a amplificação de segmentos de RNA através do uso da ____________ ___________ para converter RNA em DNA e aplicar a técnica de _______ depois.

A

transcriptase reversa; PCR

58
Q

A RT-PCR é usada para avaliar a _____________ génica e fazer a deteção de __________.

A

expressão; retrovírus

59
Q

A sequenciação de ácidos nucleicos permite determinar a ordem precisa das __________ dos nucleótidos, identificar doenças _____________ e compreender o risco de uma pessoa vir a desenvolver uma doença. É útil para fazer aconselhamento _____________, seleção de terapias e gestão de doenças.

A

bases; genéticas; reprodutivo

60
Q

Quais são as 4 técnicas principais dos testes de sequenciação do DNA?

A
  1. Sanger (dideoxy sequencing): síntese de DNA com DNA Polimerase e com ddNTPs que interrompem a elongação. Os fragmentos interrompidos são separados por eletroforese e a sequência é determinada com base na ordem de terminação de eventos.
  2. NGS (Next Generation Sequencing): permite a sequenciação paralela de biliões de fragmentos de DNA simultaneamente.
  3. Sequenciação de RNA: provides insights into gene expression levels, alternative splicing, transcript isoforms and non-coding RNAs.
  4. Single Molecule Sequencing: directly sequence inidividual DNA or RNA molecules without the need for PCR amplification. These methods offer long-read sequencing capabilities, enabling the sequencing of complex genomic regions, structural variations and RNA isoforms.
61
Q

Os testes de cultura (bacterial, viral, fungal, mycobacterial, parasitological and anaerobic) incluem o __________ e crescimento de microorganismos a partir de bioespécimes obtidas dos pacientes. Podem ser _____________ (meio de cultura é sólido - agar), líquidas (_____ comuns) ou ____________ (podem ser usadas células ____________ ou animais e são usadas para detetar alguns vírus como os adenovirujs e o herpes simplex virus, …).

A

cultivo; sólidas; celulares; humanas

62
Q

Quais são os 4 princípios básicos do controlo de qualidade?

A
  • Reliability;
  • Consistency;
  • Precision;
  • Accuracy.

Accuracy + Precision + Consistency = Reliability

63
Q

O controlo de qualidade pode ser __________ e ____________.

A

interno; externo

64
Q

O controlo de qualidade interno envolve 3 pontos. Quais são?

A
  1. Regulação regulares (calibração de equipamentos, reagentes, etc);
  2. Amostras de controlo (Control charts - using standard samples to validate data, methods and equipment);
  3. Testes paralelos.
65
Q

O controlo de qualidade externo envolve 2 pontos. Quais são?

A
  1. Comparação inter-laboratórios
  2. Participação em programas de testagem de eficiência (visited accredited organizations and regulatory agencies to assess the normal function of peer techniques and laboratories)
66
Q

Quais são algumas boas práticas?

A
  • Keep all documentation from quality control assessments;
  • Ensure traceability of all the samples, processes and analysis.
67
Q

A espetrofotometria UV-vis permite aferir sobre mudanças conformacionais e de cor das amostras. Verdadeiro ou Falso?

A

Verdadeiro

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