ppt4 : micoquerismo Flashcards
qual a relação que os cientistas acham entre doenças neurologicas com DNA
- É uma suposição se o DNA do feto masculino que está na barriga da mãe se pode permanecer no corpo da mãe (mesmo depois do parto) e se está relacionado com doenças neurológicas
- Ou seja, os cientista já sabem que o DNA da mãe passa para o feto mas querem saber se o contrário tbm acontece
que tecnica usam para obter resultaods
- Usando o PCR quantitativo em tempo real * Atraves do pcr quantitativo podemos distinguir o que é DNA fetal com o materno e quantificar
o que é o microquerismo
- O microquerismo é basicamente a troca de moleculas de DNA entre o bebé e a mãe e estas podem permanecer no corpo da mãe durante alguns anos
- Este processo ou é benefico como por exemplo para a regeneração dos tecidos como pode ser prejudicial
o microquerismo pode ser estabelicido entre quem
- O microquerismo pode ser entra a mãe e o feto mas tbm pode ser entre irmão, gémeos ou não, se não forem é DNA do irmão mais velho que ficou na barriga da mãe e passa para uma segunda gravidez
como ocorre o microquerismo
- Durante a gravidez, o DNA fetal atravessa a placenta e entre no corpo da mãe e fica alojado no pulmão , coração e figado
- Mas a maioria das celulas são células tronco que acabam por diferenciarem-se e podem ser benéficas
qual a proporção de DNA fetal nas mães
- A proporção de DNA fetal que existe normalmente é 1 em 100.000 células maternas o que torna bastante dificil e caro de detetar (6,2% do dna materno são dna fetal)
- Apos o nascimento , a maioria desaparece do corpo da mãe por apoptose
vantagens do microquerismo
Proteger e reforçar o sistema imunologico da mãe
Regeneração e cicatrização dos tecidos maternos
Vinculo emocional
desvantagens do microquerismo
Ansiedade e stress
Doenças autoimunes
que pcrs há
PCR convencional
PCR em tempo real
PT-PCR- específica para análise de mRNA;
Multiplex PCR, em que são utilizados diversos primers específicos e diversos DNAs;
Nested PCR, usada em situações em que a PCR clássica não é suficiente para deteção;
PCR isotérmico, em que é efetuada uma amplificação isotérmica mediada por um loop, com alta especificidade, sensibilidade e rapidez;
PCR Hot-Start, uma variação da PCR clássica que aumenta a especificidade e a sensibilidade da amplificação do DNA;
PCR direta, em que não há necessidade de extração do DNA;
PCR de fragmentos ricos em GC, utlizada na amplificação de fragmentos ricos em guanina e citosina;
PCR Longa, que amplifica DNAs maiores que as cadeias da PCR convencional
objetivo do pcr convencional
- O PCR serve para para copiar fragmentos especificos de DNA muitas vezes, usando a enzima Taq DNA polimerase pois resiste a temperaturas altas
etapas do pcr convencional
- Desnaturação: a 95 graus vai dissociar as moleculas de DNA através das quebras das pontes de hidrogenio
- Anelamento : o DNA vai esfriar (37º-72º) e há a junçao de primers (pequeno DNA complementar à regiao )
- Extensão: A Taq polimerase amplifica o DNA, criando novas cadeias. Isso acontece na direção de 3’ para 5’.
São vários ciclos feitos num termociclador que controla as temperaturas e o tempo de cada ciclo. Com isso, a quantidade de DNA aumenta exponencialmente.
Por fim, a PCR é analisada através de uma eletroforese em Luz UV.
o que é o qPCR
PCR em tempo real ou qPCR
* É basicamente o mesmo mas permite estar acompanhar a PCR ao longo de todo o processo e não apenas no fim
etapas do qPCR
Amplificação do DNA : é o mesmo que o PCR convencional
Deteção em tempo real : durante o processo da amplificação, vai ser controlado ao usar um corante fluorescente, o SYBR green.Quanto mais DNA é produzido, mais forte a fluorescência, que é medida em tempo real.
como funciona o SYBR green
- O SYBR green vai ligar-se às cadeias de DNA e quando for excitado por uma faixa de comprimento de luz especifico, o corante vai emitir fluorescência
- À medida que o DNA é amplificado mais cadeias se vão formando e mais SYBR Green se vai ligar as mesmas, o que resulta num aumento de fluorescência que pode ser medido em tempo real.
como se calcula a quantidade inicial de DNA
- A quantidade inicial de DNA vai ser calculada através do CT isto porque, é este valor que nos indica o número de ciclos necessários para que a amplificação seja suficientemente forte para emitir sinal. Este valor é inversamente proporcional à quantidade de DNA, ou seja: quanto maior a quantidade de DNA menor será o valor de CT, o que significa que menos ciclos serão necessários para se detetar o DNA; quanto menor a quantidade de DNA inicial maior será o valor de CT, mais ciclos serão necessários para detetar o DNA
