Pour Plate

Question 1

Finalidade da técnica de Pour Plate

Answer 1

Serve para observar e quantificar microrganismos em uma determinada amostra submetida à diluição seriada (exemplo: contagem de microrganismos do leite), através da contagem de colônias em placa.

Question 2

Diluição Seriada

Answer 2

É necessário realizar a diluição seriada da amostra em água peptonada
Transferir, com uma pipeta estéril, 1mL da amostra de leite e adicionar em 9mL de água peptonada (diluição 1:10)
Transferir 1mL da diluição de 1:10 em 9mL de água peptonada (diluição 1:100), e assim por adiante, até obter a diluição de 1:1.000.000 (realizar transferências de 1mL das diluições anteriores para os tubos subsequentes até atingir a diluição 10 elevado a -6).

Question 3

Técnica Pour Plate

Answer 3

Realizar a semeadura em pour plate das três últimas diluições (10-4, 10-5 e 10-6), em duplicata, para obter a média
Adicionar 1mL de cada diluição em uma placa de Petri vazia e estéril, e em seguida, adicionar o meio de cultura fundido (em torno de 45ºC)
Para a quantificação de colônias do leite, utilizar o Milk agar
Agitar com movimentos rotatórios suaves, para misturar o meio de cultura
Incubar a 35-37oC por 24 horas e fazer a leitura no dia seguinte

Question 4

Contador de colônias

Answer 4

Indicado para contagem de colônias em placas de Petri. É útil uma vez que torna o processo mais rápido e confiável. Possui lupa para a magnificação, luz e caneta para marcação de colônias.

Question 5

Leitura das placas

Answer 5

Observar as placas e contar as que tiverem entre 30 a 300 colônias
Contar todas as colônias e anotar o resultado
Multiplicar o valor obtido pela inversa da diluição para obter o número de Unidades Formadoras de Colônias por mililitro de leite (UFC/mL).