PCR Flashcards
qué se requiere para hacer una PCR
- Secuencia de DNA
- Enzima DNA polimerasa
- Desoxiribonucleotidos (dNTP)
- Primers
- Cofactores
Polimerasa que se utiliza en la PCR y por qué
- Thermus aquaticus (Taq)
- soporta los 95 grados a los que estar el termociclador
dónde se encuentra la Taq
en una bacteria situada en geisers
dNTP requeridos en la PCR
- dATP
- dCTP
- dGTP
- dTTP
que función realiza un amortiguador en la PCR
Favorece un pH adecuado
* 8.4
Cofactor utilizado en una PCR
- Cloruro de Magnesio ya que el magnesio es cofactor de la Taq polimerasa
function de los iniciadores en una PCR
Reconocer secuencias blanco en el DNA molde
características de los iniciadores
- Proporcionan un extremo 3’
- Alto contenido en GC
por que los iniciadores tienen alto contenido de GC
No se desprende fácil de la cadena debido a que tiene 3 puentes de hidrógeno
tipos de iniciadores
- Forward 5’ a 3’
- Reverse 3’ a 5’
etapas del procedimiento
- Desnaturalización
- Hibridación
- Extensión
características de la etapa de desnaturalización
Se separan las cadenas DNA
* 95ºC (20 a 30 seg)
características de la etapa de hibridación
Los primers se alinean al extremo 3 ́
* 50ºC a 60ºC
de qué depende la temperatura de hibridación
del primer que se utilizará
características de la etapa de extensión
La Taq polimerasa agrega dNTP ́s complementarios para crear cadenas completas
* 72ºC
qué es la electroforesis
Técnica mediante la cual se separan las biomoleculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico
Gel de agarosa qué es
polisacárido extraído de algas marinas
función del gel de agarosa
separa fragmentos de ácido desoxirribonucleico
Funcionamiento del gel de agarosa
- La matriz del gel genera poros
- Cuanta mas concentración el poro será más pequeño
- Si el segmento de DNA es pequeño requere un poro pequeño para que se atrape
qué ocurre luego de la obtención de la PCR
- Realizar un gel de electroforesis
- Agregar los marcadores de peso molecular
- Transiluminador ultravioleta
que son los marcadores de peso molecular
- Mezcla de moléculas de DNA o de proteínas de tamaño conocido
- Permiten comparar el tamaño de las moléculas contenidos en las muestras
