Análisis de ácidos nucleicos Flashcards
etapas para la extracción DNA por la técnica fenol- cloroformo
- Lisis de las células y liberación de DNA
- Extracción de proteínas y lípidos con solventes orgánicos
- Precipitación de DNA
- Lavado de DNA
qué ocurre en la lisis de las células y liberación de DNA para la extracción por la técnica fenol- cloroformo
- Lisis de eritrocitos con cloruro de amonio
- Rompe membranas
qué ocurre en la extracción de proteínas y lípidos con solventes orgánicos para la extracción por la técnica fenol- cloroformo
se obtiene:
* fase fenólica
* fase acuosa
con el uso de:
* Fenol
* cloroformo
* alcohol isoamilico
qué contiene la fase fenólica obtenida en la extracción DNA por la técnica fenol- cloroformo
Proteínas y lípidos
qué contiene la fase acuosa obtenida en la extracción DNA por la técnica fenol- cloroformo
Ácidos nucleicos
qué ocurre en la precipitación de DNA para la extracción por la técnica fenol- cloroformo
- Se desnaturalizan proteínas
- Solución salina saturada
- Etanol 100%
qué ocurre en el lavado de DNA para la extracción por la técnica fenol- cloroformo
se agrega:
* Etanol 70%
* Agua
métodos que se utilizan para cuantificar el DNA
- Espectrofotometría
- Fluorometria
- PCR
característica de las soluciones que permite el funcionamiento de la espectrofotometría
Cualquier solucion con moleculas suspendidas permite el paso de un haz de luz
parámetro de la espectrofotometría
Mientras mas luz absorba mayor concentración de DNA
cual es la capacidad de absorción de radiación del DNA y RNA
260 nm
cual es la capacidad de absorción de radiación de las proteínas
280 nm
cual es la capacidad de absorción de radiación del fenol
270 nm
como funciona la fluorometria
- Se unen de forma específica colorantes fluorescentes al ácido nucleico
- Absorbe la luz a una longitud de onda y emite una superior
parámetro de la fluorometría
La concentración es proporcional a la intensidad de emisión fluorescente
