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Biología molecular > DNA recombinante > Flashcards

DNA recombinante Flashcards

1
Q

qué es un vector

A

Es una molécula de DNA de doble cadena que puede albergar DNA de origen exógeno

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2
Q

de dónde provienen las enzimas de restricción para DNA recombinante

A

de las bacterias

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3
Q

enzimas del sistema de modificación

A

Metilasas

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4
Q

qué hacen las metilasas como parte del sistema de modificación

A
  • Metilan el ADN propio en residuos de Adenina o Citosina
  • Para que el pedazo nuevo que se sintetizó no se reconozca como extraño
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5
Q

uso de las endonucleasas de restricción

A

Cortar el fragmento del gen deseado

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6
Q

que son las endonucleasas de restricción

A

Es un mecanismo de defensa de las bacterias frente a la entrada de ADN foráneo.

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7
Q

que le confiere la metilación al DNA

A

es inmune, si no sería degradado

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8
Q

tipos de endonucleasas de restricción

A
  • I
  • II
  • II
  • IV
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9
Q

características del corte de la endonucleasa de restricción tipo I

A
  • Asimétrico
  • Reconoce el sitio pero corta 1000pb lejos
  • Aleatorio (río abajo o arriba)
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10
Q

características del corte de la endonucleasa de restricción tipo II

A
  • Reconoce secuencias palindrómicas
  • Sitio de reconocimiento es igual al de corte
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11
Q

características del corte de la endonucleasa de restricción tipo III

A
  • Corte asimétrico
  • Reconoce y corta 20pb rio arriba o abajo
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12
Q

características del corte de la endonucleasa de restricción tipo IV

A

Reconoce DNA metilado

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13
Q

Tipos de corte

A
  • asimétrico - cohesivo
  • simétrico - Romos
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14
Q

Relación entre la enzima que se usa para cortar el plásmido y el DNA de la bacteria

A
  • Se usa la misma enzima para que sean complementarios
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15
Q

Tipos de vectores

A
  • Clonación
  • Expresión
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16
Q

cuales son los vectores de clonación

A
  • plásmidos
  • bacteriófagos
  • fagémidos
  • cósmidos
  • cromosomas artificiales
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17
Q

cuales son los vectores de expresión

A
  • plásmidos
  • bacteriófagos
18
Q

funciones de los vectores de clonación

A

Almacenan secuencias y se obtienen grandes cantidades de DNA

19
Q

funciones de los vectores de expresión

A
  • Transportar un gen porque se puede retirar el gen externo
  • Producir una proteína
20
Q

partes de un vector de clonación

A
  • ORI
  • Sitio múltiple de clonación
  • Marcaje de selección
21
Q

qué es el sitio múltiple de clonación

A

Secuencia especifica que es reconocida por las enzimas de restricción para poder insertar el DNA complementario

22
Q

Tipos de marcaje de selección

A
  • Un gen que le de resistencia a un antibiotico
  • Enzima para que tome alimento - Gen de β-galactosidasa
  • Proteína y tinte para observarlo - Proteína verde fluorescente
23
Q

partes de un vector de expresión

A
  • Origen de replicación
  • Sitio múltiple de clonación
  • Marcador de selección
  • Promotor
  • IRES
  • Secuencia de poliA
24
Q

que significa IRES

A

Sitio de entrada a ribosoma

25
Q

Características de los plásmidos

A
  • dsDNA (double strand)
  • Circulares
  • Separados del DNA cromosomico
  • Se le pone genes pequeños
26
Q

donde se pueden encontrar los plásmidos

A

Bacterias y levaduras

27
Q

qué es un Bacteriófago

A

Virus que infectan a las bacterias

28
Q

cómo se modifica un bacteriófago para funcionar como vector

A
  • Se modifica genéticamente
  • Eliminar genes que no se requieren para la replicación y empaquetamiento ( para que ya no se replique y no haya más bacteriofagos)
29
Q

característica del bacteriófago como vector

A

Se le puede poner un gen muy grande

30
Q

Qué es un cósmido

A
  • Vector híbrido
  • Se puede agregar un gen muy grande
31
Q

características de plásmidos que comparte el cósmido

A
  • Gen de resistencia a los antibióticos
  • Tiene un sito ORI
32
Q

características de bacteriófagos que comparte el cósmido

A

Contiene Cos para empaquetamiento y que se pueda poner en el bacteriófago

33
Q

qué son los fagémidos

A

Plásmido al que se le incorpora el origen de replicacion de un fago

34
Q

características de los fagémidos

A

No tienen sitios cos entonces se tiene que buscar un bacteriofago que pueda albergar el DNA lineal

35
Q

Cromosomas artificiales cuales son

A
  • BAC (bacterias)
  • YAC (levaduras)
36
Q

Proceso para utilizar cromosomas artificiales BAC

A
  • Se saca el DNA cromosomico
  • Modificar para que solo sintetice una proteína específica
  • se dejan los genes para que la bacteria pueda seguir viviendo
37
Q

características de cromosomas artificiales YAC

A
  • Poco estables
  • Pueden crecer diferentes YAC en una célula
  • Baja eficacia de transformación
  • pueden clonar genes mas grandes que los plasmidos
38
Q

características de cromosomas artificiales BAC

A
  • Alta estabilidad
39
Q

Pasos para la clonación

A
  • Preparación del inserto que se va a clonar con enzimas de restricción
  • Preparación del vector con enzimas de restricción, desfosforilacion del vector y purificación del plásmido
  • Ligación del inserto y el vector con una ligasa
  • Preparación de células competentes aumentando la permeabilidad de la membrana para aceptar el vector
  • Transformación celular
  • Identificación de las colonias celulares con el vector recombinante
40
Q

cósmido es un hibrido entre_____

A

Plásmido y bacteriófago

Biología molecular (27 decks)

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