DNA recombinante Flashcards
qué es un vector
Es una molécula de DNA de doble cadena que puede albergar DNA de origen exógeno
de dónde provienen las enzimas de restricción para DNA recombinante
de las bacterias
enzimas del sistema de modificación
Metilasas
qué hacen las metilasas como parte del sistema de modificación
- Metilan el ADN propio en residuos de Adenina o Citosina
- Para que el pedazo nuevo que se sintetizó no se reconozca como extraño
uso de las endonucleasas de restricción
Cortar el fragmento del gen deseado
que son las endonucleasas de restricción
Es un mecanismo de defensa de las bacterias frente a la entrada de ADN foráneo.
que le confiere la metilación al DNA
es inmune, si no sería degradado
tipos de endonucleasas de restricción
- I
- II
- II
- IV
características del corte de la endonucleasa de restricción tipo I
- Asimétrico
- Reconoce el sitio pero corta 1000pb lejos
- Aleatorio (río abajo o arriba)
características del corte de la endonucleasa de restricción tipo II
- Reconoce secuencias palindrómicas
- Sitio de reconocimiento es igual al de corte
características del corte de la endonucleasa de restricción tipo III
- Corte asimétrico
- Reconoce y corta 20pb rio arriba o abajo
características del corte de la endonucleasa de restricción tipo IV
Reconoce DNA metilado
Tipos de corte
- asimétrico - cohesivo
- simétrico - Romos
Relación entre la enzima que se usa para cortar el plásmido y el DNA de la bacteria
- Se usa la misma enzima para que sean complementarios
Tipos de vectores
- Clonación
- Expresión
cuales son los vectores de clonación
- plásmidos
- bacteriófagos
- fagémidos
- cósmidos
- cromosomas artificiales
cuales son los vectores de expresión
- plásmidos
- bacteriófagos
funciones de los vectores de clonación
Almacenan secuencias y se obtienen grandes cantidades de DNA
funciones de los vectores de expresión
- Transportar un gen porque se puede retirar el gen externo
- Producir una proteína
partes de un vector de clonación
- ORI
- Sitio múltiple de clonación
- Marcaje de selección
qué es el sitio múltiple de clonación
Secuencia especifica que es reconocida por las enzimas de restricción para poder insertar el DNA complementario
Tipos de marcaje de selección
- Un gen que le de resistencia a un antibiotico
- Enzima para que tome alimento - Gen de β-galactosidasa
- Proteína y tinte para observarlo - Proteína verde fluorescente
partes de un vector de expresión
- Origen de replicación
- Sitio múltiple de clonación
- Marcador de selección
- Promotor
- IRES
- Secuencia de poliA
que significa IRES
Sitio de entrada a ribosoma
Características de los plásmidos
- dsDNA (double strand)
- Circulares
- Separados del DNA cromosomico
- Se le pone genes pequeños
donde se pueden encontrar los plásmidos
Bacterias y levaduras
qué es un Bacteriófago
Virus que infectan a las bacterias
cómo se modifica un bacteriófago para funcionar como vector
- Se modifica genéticamente
- Eliminar genes que no se requieren para la replicación y empaquetamiento ( para que ya no se replique y no haya más bacteriofagos)
característica del bacteriófago como vector
Se le puede poner un gen muy grande
Qué es un cósmido
- Vector híbrido
- Se puede agregar un gen muy grande
características de plásmidos que comparte el cósmido
- Gen de resistencia a los antibióticos
- Tiene un sito ORI
características de bacteriófagos que comparte el cósmido
Contiene Cos para empaquetamiento y que se pueda poner en el bacteriófago
qué son los fagémidos
Plásmido al que se le incorpora el origen de replicacion de un fago
características de los fagémidos
No tienen sitios cos entonces se tiene que buscar un bacteriofago que pueda albergar el DNA lineal
Cromosomas artificiales cuales son
- BAC (bacterias)
- YAC (levaduras)
Proceso para utilizar cromosomas artificiales BAC
- Se saca el DNA cromosomico
- Modificar para que solo sintetice una proteína específica
- se dejan los genes para que la bacteria pueda seguir viviendo
características de cromosomas artificiales YAC
- Poco estables
- Pueden crecer diferentes YAC en una célula
- Baja eficacia de transformación
- pueden clonar genes mas grandes que los plasmidos
características de cromosomas artificiales BAC
- Alta estabilidad
Pasos para la clonación
- Preparación del inserto que se va a clonar con enzimas de restricción
- Preparación del vector con enzimas de restricción, desfosforilacion del vector y purificación del plásmido
- Ligación del inserto y el vector con una ligasa
- Preparación de células competentes aumentando la permeabilidad de la membrana para aceptar el vector
- Transformación celular
- Identificación de las colonias celulares con el vector recombinante
cósmido es un hibrido entre_____
Plásmido y bacteriófago
