OGM: résumé Flashcards
Quelles sont les étapes de la transgenèse?
- Prélèvement du gène d’intérêt à l’aide d’enzymes de restriction qui coupent l’ADN à des endroits spécifiques.
- Insertion du gène dans un vecteur (virus, plasmide bactérien ou autre système).
- Introduction du gène modifié dans l’organisme hôte.
- **Sélection* et multiplication des cellules ayant intégré le gène.
Méthodes d’introduction du gène: directes et indirectes
Transfert indirect
Utilisation de la bactérie
Agrobacterium tumefaciens qui peut naturellement transférer une partie de son ADN dans les cellules végétales
Transfert direct (4)
Plusieurs techniques sont employées :
1. Biolistique (canon à gène) : Des billes microscopiques enrobées d’ADN, sont projetées à grande vitesse sur les cellules à modifier.
2. Électroporation : Un choc électrique perméabilise la membrane cellulaire, permettant l’entrée de l’ADN.
3. Utilisation de PolyÉthylène Glycol (PEG) : Ce polymère déstabilise temporairement les membranes plasmiques pour faciliter l’entrée de l’ADN.
Micro-injection : Injection directe de l’ADN dans le noyau cellulaire.
=>Ces techniques permettent de créer des organismes avec de nouvelles combinaisons génétiques qui ne se produiraient pas naturellemen
Définition OGM
Organisme vivant (micro-organisme, végétal, animal) ayant subi une modification non naturelle de ses caractéristiques génétiques initiales, par ajout, suppresion ou remplacement d’au moins un gène.
Rappel def OGM:Organisme vivant (micro-organisme, végétal, animal) ayant subi une modification non naturelle de ses caractéristiques génétiques initiales, par ajout, suppresion ou remplacement d’au moins un gène.
Comment sont appelés les gènes étrangers? L’OGM? Et les procédés?
Ce sont des “transgènes”, l’OGM un organisme “transgénique”, et l’ensemble des procédés conduisant à ce type d’OGM est appelé “transgenèse”
Que fait-on pour, à partir d’un organisme A, obtenir un organisme “cisgénique”? (4)
Organisme A
1- on lui extrait de l’ADN génomique (g)
2-on cloine le “gène d’interêt” dans un vecteur
3- on modifie: –>mutation/déletion (savoir à quoi il sert)/changement de promoteur (étudier force du promoteur, etc)/…
4-Réintroduction –>organisme A
Que fait-on pour, à partir d’un organisme A, obtenir un organisme “transgénique”? (3)
Organisme A
1- on lui extrait de l’ARNm messager (m)
2-on cloine le “gène d’interêt” dans un vecteur
3-Introduction –>organisme B
On lui a introduit des gènes étrangers de A à B –>modification génétique
Quelles sont les grandes étapes du clonage d’un fragment d’ADNg?
6 étapes
Cellules organisme A
1. extraction ADNg
2.digestion par des enzymes de restriction de l’ADN et AU MEME TEMPS, digestion d’une partie du plasmide par la même enzyme de restriction (où devrait après être intégré l’ADN)
3. ligation: insertion des fragments dans les vecteurs
=> on a alors des vecteurs recombinants (qui ont intégré l’ADNg ) et des natifs
4. Transformation:
introduction des vecteurs recombiants ou natifs dans les cellules hôtes
5. Sélection des transformants hebergeant un vecteur (dans un milieu de culture avec l’antibiotique)
=>la collection de clones ainsi obtenus= banque
6. Criblage de la banque (sélection du clone bactérien hébérgeant le vecteur d’interêt)
7. OBTENTION DU VECTEUR d’interet
Que sont les enzymes de restriction?
Des endonucléases qui coupe un ADN double brin sur les deux brins au niveau de séquences spécifiques palindromiques= sites de restriction
Propriété d’un bon vecteur plasmidique
-petite taille
- présence d’une origine de réplication (ori)
-présence d’un gène marqueur
=>généralement un gène conférant une resistance aux antibiotiques: Ant R
- présence d’un multi-site de clonage: MCS
–>petite séquence artificielle contenant une succession de sites de restriction uniques pour le vecteur
MCS: =>permettre à un morceau d’ADN de s’y insérer
Quelle est une autrre méthode clonage de l’ADNg?
La PCR : Polymerase Chain Reaction
La plupart des MGM (brevetés avec une perspective commerciale) ne sont pas transgéniques, pourquoi?
C’est une opportunité pour échapper à la lesgislation européenne
Ils ‘appelent SAGE (SANS AJOUTS DE GENES EXTERIEURS)
–> levure de brasserie génétiquement mod–> a accumulé composé mutagène
La mutagenèse aléatoire qui se fait souvent chez les plantes n’est pas _____1.
- légiférié
Quel est le principe général des nouvelles techniques?
En premier –>activation de nucléase dirigée–>coupure sur les deux brins d’ADN
=>Réparation par
* raboutage: insertion/délétion de nucléotides=>inactivation d’un gène
* -recombinaison homologue:
+ ADN donneur
a)”modification” d’un gène: substitutions d’1 ou quelques lettres=>mutagenèse dirigée
b) insertion d’un gène étranger
=>transgenèse ciblée
Qu’est-ce que le gène drive? forçage génétique?
=> permet à un gène d’être transmis avec quasi-certitude par reproduction sexuée.
Enjeux et controverses
Les OGM soulèvent plusieurs questions, lesquelles?
Les OGM soulèvent plusieurs questions :
1. Sanitaires et environnementales : Incertitudes sur les effets à long terme4.
2. Économiques : Risque de dépendance des agriculteurs envers les firmes productrices de semences OGM4.
3. Biodiversité : Craintes concernant la disparition de variétés locales