OGM: résumé Flashcards

1
Q

Quelles sont les étapes de la transgenèse?

A
  1. Prélèvement du gène d’intérêt à l’aide d’enzymes de restriction qui coupent l’ADN à des endroits spécifiques.
  2. Insertion du gène dans un vecteur (virus, plasmide bactérien ou autre système).
  3. Introduction du gène modifié dans l’organisme hôte.
  4. **Sélection* et multiplication des cellules ayant intégré le gène.
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Q

Méthodes d’introduction du gène: directes et indirectes

A

Transfert indirect
Utilisation de la bactérie
Agrobacterium tumefaciens qui peut naturellement transférer une partie de son ADN dans les cellules végétales

Transfert direct (4)
Plusieurs techniques sont employées :
1. Biolistique (canon à gène) : Des billes microscopiques enrobées d’ADN, sont projetées à grande vitesse sur les cellules à modifier.
2. Électroporation : Un choc électrique perméabilise la membrane cellulaire, permettant l’entrée de l’ADN.
3. Utilisation de PolyÉthylène Glycol (PEG) : Ce polymère déstabilise temporairement les membranes plasmiques pour faciliter l’entrée de l’ADN.
Micro-injection : Injection directe de l’ADN dans le noyau cellulaire.

=>Ces techniques permettent de créer des organismes avec de nouvelles combinaisons génétiques qui ne se produiraient pas naturellemen

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3
Q

Définition OGM

A

Organisme vivant (micro-organisme, végétal, animal) ayant subi une modification non naturelle de ses caractéristiques génétiques initiales, par ajout, suppresion ou remplacement d’au moins un gène.

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4
Q

Rappel def OGM:Organisme vivant (micro-organisme, végétal, animal) ayant subi une modification non naturelle de ses caractéristiques génétiques initiales, par ajout, suppresion ou remplacement d’au moins un gène.

Comment sont appelés les gènes étrangers? L’OGM? Et les procédés?

A

Ce sont des “transgènes”, l’OGM un organisme “transgénique”, et l’ensemble des procédés conduisant à ce type d’OGM est appelé “transgenèse”

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5
Q

Que fait-on pour, à partir d’un organisme A, obtenir un organisme “cisgénique”? (4)

A

Organisme A
1- on lui extrait de l’ADN génomique (g)
2-on cloine le “gène d’interêt” dans un vecteur
3- on modifie: –>mutation/déletion (savoir à quoi il sert)/changement de promoteur (étudier force du promoteur, etc)/…
4-Réintroduction –>organisme A

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6
Q

Que fait-on pour, à partir d’un organisme A, obtenir un organisme “transgénique”? (3)

A

Organisme A
1- on lui extrait de l’ARNm messager (m)
2-on cloine le “gène d’interêt” dans un vecteur
3-Introduction –>organisme B

On lui a introduit des gènes étrangers de A à B –>modification génétique

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7
Q

Quelles sont les grandes étapes du clonage d’un fragment d’ADNg?
6 étapes

A

Cellules organisme A
1. extraction ADNg
2.digestion par des enzymes de restriction de l’ADN et AU MEME TEMPS, digestion d’une partie du plasmide par la même enzyme de restriction (où devrait après être intégré l’ADN)
3. ligation: insertion des fragments dans les vecteurs
=> on a alors des vecteurs recombinants (qui ont intégré l’ADNg ) et des natifs
4. Transformation:
introduction des vecteurs recombiants ou natifs dans les cellules hôtes
5. Sélection des transformants hebergeant un vecteur (dans un milieu de culture avec l’antibiotique)
=>la collection de clones ainsi obtenus= banque
6. Criblage de la banque (sélection du clone bactérien hébérgeant le vecteur d’interêt)
7. OBTENTION DU VECTEUR d’interet

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8
Q

Que sont les enzymes de restriction?

A

Des endonucléases qui coupe un ADN double brin sur les deux brins au niveau de séquences spécifiques palindromiques= sites de restriction

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9
Q

Propriété d’un bon vecteur plasmidique

A

-petite taille
- présence d’une origine de réplication (ori)
-présence d’un gène marqueur
=>généralement un gène conférant une resistance aux antibiotiques: Ant R
- présence d’un multi-site de clonage: MCS
–>petite séquence artificielle contenant une succession de sites de restriction uniques pour le vecteur

MCS: =>permettre à un morceau d’ADN de s’y insérer

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10
Q

Quelle est une autrre méthode clonage de l’ADNg?

A

La PCR : Polymerase Chain Reaction

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11
Q

La plupart des MGM (brevetés avec une perspective commerciale) ne sont pas transgéniques, pourquoi?

A

C’est une opportunité pour échapper à la lesgislation européenne
Ils ‘appelent SAGE (SANS AJOUTS DE GENES EXTERIEURS)
–> levure de brasserie génétiquement mod–> a accumulé composé mutagène

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12
Q

La mutagenèse aléatoire qui se fait souvent chez les plantes n’est pas _____1.

A
  1. légiférié
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13
Q

Quel est le principe général des nouvelles techniques?

A

En premier –>activation de nucléase dirigée–>coupure sur les deux brins d’ADN
=>Réparation par
* raboutage: insertion/délétion de nucléotides=>inactivation d’un gène
* -recombinaison homologue:
+ ADN donneur

a)”modification” d’un gène: substitutions d’1 ou quelques lettres=>mutagenèse dirigée
b) insertion d’un gène étranger
=>transgenèse ciblée

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14
Q

Qu’est-ce que le gène drive? forçage génétique?

A

=> permet à un gène d’être transmis avec quasi-certitude par reproduction sexuée.

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15
Q

Enjeux et controverses
Les OGM soulèvent plusieurs questions, lesquelles?

A

Les OGM soulèvent plusieurs questions :
1. Sanitaires et environnementales : Incertitudes sur les effets à long terme4.
2. Économiques : Risque de dépendance des agriculteurs envers les firmes productrices de semences OGM4.
3. Biodiversité : Craintes concernant la disparition de variétés locales

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16
Q

Utilisations et types d’OGM
Les principales plantes cultivées en OGM dans le monde sont le coton, le soja, le maïs et le colza4. Ces cultures visent généralement à quoi?

A

-Améliorer la résistance aux maladies et aux parasites
-Augmenter la tolérance au stress hydrique (conditions aboitiques/biotiques)
-Accroître les rendements

17
Q

Gène drive, quel principe?

A

les ciseaux génétiques CRISPR/Cas9 servent à reconnaître une séquence spécifique du génome et à couper l’ADN à cet endroit précis. À l’endroit de la coupure, les mécanismes naturels de réparation de l’ADN permettent aux gènes artificiels de se copier dans le génome ou de remplacer la version naturelle du gène qui leur ressemblent.

Dans les organismes à reproduction sexuée, chaque descendant contient une copie des chromosomes du père et une copie des chromosomes da la mère. Dans le processus de forçage génétique, on peut dire, en simplifiant, que si le père est porteur de la cassette de forçage génétique, les ciseaux moléculaires CRISPR/Cas permettent aux gènes artificiels de se recopier depuis les chromosomes du père sur les chromosomes de la mère en éliminant toute séquence d’ADN qui leur ressemblent. Ainsi, à chaque nouvelle génération, le génome des descendants du porteur de la cassette de forçage génétique est modifié. Les règles de l’hérédité naturelle dans les organismes à reproduction sexuée sont contournées et la cassette de forçage génétique se propage de génération en génération, éliminant toute séquence d’ADN qui lui ressemble.

Detail stammbaum GD2 500