Monoklonala Ak inom cancerterapi

Question 1

beskriv strukturen för en antikropp

Answer 1

består av en Fab-del och en Fc-del

Fc-delen binder till Fc-receptorer medans Fab-delen binder till antigenet

är uppbyggd av 4 tunga kedjor och 2 lätta kedjor där de yttersta delarna är Fab-delarna har hypervariabla regioner

Question 2

vilka egenskaper har polyklonala antikroppar?

Answer 2

dessa har olika specificitet med batchvariabilitet

är starkt immunogena

tas ut från blodet av ett djur

Question 3

Förklara hur ett hybridom tas fram, vad används de till?

Answer 3

Antikroppsproducerande B-lymfocyt tas ut från ett immuniserat djur, dessa kan inte växa in vitro men har vissa enzym som behövs

Hybridiseras med en tumörcell av B-lymfocytsursprung som inte producerar antikroppar, dessa har ohejdad tillväxt men en enzymdefekt som gör att de inte kan växa i selektionsmedium

“äkta” hybridom selekteras ut, kontrolleras för antikroppsproduktion och sen isoleras klonen

-> produktion av monoklonala antikroppar

Question 4

vilka egenskaper har monoklonala antikroppar?

Answer 4

dessa är identiska, från samma klon
selektion av hög affinitet

kan användas för massproduktion
immunogena (från möss)

Question 5

beskriv egenskaper för rekombinanta antikroppar

Answer 5

dessa är identiska
har hög affinitet
kan användas för massproduktion, är billigare

kan klippas till små fragment och därmed skräddarsys, mindre immunogena (humaniserade)

Question 6

ge exempel på framtidens antikroppar som kan användas i cancerterapi

Answer 6

mimetics: syntetiska molekyler som kan härma antikropparnas egenskaper

naturliga antikroppar från olika arter som gör enklare typer av Ak eller Ig-liknande molekyler t.ex. hajar, kameler och insekter

Question 7

vad är fördelarna med monoklonala antikroppar vid cancerterapi?

Answer 7

dödar med specificitet
dödar tumörceller som blivit resistenta mot annan behandling
dödar även vilande tumörceller
kan kombineras med annan terapi utan ökad toxicitet

Question 8

vad är viktigt att tänka på vid utvecklandet av en antikroppsterapi?

Answer 8

Bra targetstruktur:

finns endast på tumörcellen
finns på alla tumörceller
finns på många olika typer
sitter tillgängligt för antikroppar
stabil-förändras ej av mutationer
sitter fast och spjälkas inte av

Question 9

ge exempel på tumörspecifika och tumörassocierade antigen

Answer 9

Normala antigen:
klonala antigen
differentieringsantigen
embryonala antigen
överuttryck av antigen
antigen i fel vävnad

muterade antigen- onkogener, supressorgener (RAS,p53), receptorer för tillväxtfaktorer

virusantigen

Question 10

ge exempel på targets som inte sitter på tumörcellen

Answer 10

antikroppar mot molekyler på blodkärl

antikroppar som binder till molekyler på immunceller

Question 11

hur kan blodkärl användas som mål med antikroppar och hur hjälper det vid cancerterapi?

Answer 11

Targets:
VEGF
fibronectin (unika för tumörvävnad)
integriner

förhindrar angiogenes vilket är essentiellt för tillväxt av tumörer

Question 12

hur kan immunceller användas som targets?

Answer 12

kan rikta sig mot CTLA-4 (=inhiberande, binds av B7)vilket gör att T-celler lättare aktiveras och kan avdöda cancerceller

kan även binda till PD-1L vilket finns på APC och kan inhibera T-celler, Ak gör att T-celler inte inhiberas

Question 13

vad finns det för olika monoklonala antikroppar inom cancerterapi?

Answer 13

nakna antikroppar

konjugerade antikroppar

bispecifika antikroppar

CAR T-celler

Question 14

hur kan nakna antikroppar fungera inom cancerterapi?

Answer 14

negativ signalering

receptorblockad ex. tillväxtfaktorer

dimeriseringsblockering- receptortyrosinkinaser måste dimerisera för att ge signal

komplementaktivering- Ak binder tumörcell, komplement binder till Fc-delen-> MAC-komplexet

ADCC- Ak binder Ag, Nk-cell binder till Ak via CDC16 -> utsläpp a perforin -> lysering

Question 15

vad finns det för olika Fc-receptorer som man ex. kan rikta en behandling mot inom mk-cancerterapi?

Answer 15

CD16: NK-celler, makrofager, neutrofiler

CD32: makrofager, neutrofiler, trombocyter

D64: makrofager, neutrofiler, dendritiska celler

Question 16

hur kan man optimera bindningen på Fc-receptorer?

Answer 16

man kan modulera Fc-delen på antikroppen genom att påverka glykosyleringen för att skapa optimal bindning till önskad Fc-receptor

FcR binder subklasser av IgG med olika affinitet

Question 17

hur kan konjugerade antikroppar användas inom cancerterapi? vad är fördelen?

Answer 17

man kan använda antikroppar konjugerade till isotoper, cytostatika, toxiner, cytokiner

finns även ADEPT (antibody directed enzyme prodrug therapy)

fördelen är att effekten är lm endast har verkar

Question 18

vad innebär “bystander” effekten? vid vilken behandling sker detta?

Answer 18

det innebär att celler runt om tumörcellen också drabbas, sker vid antikroppsbehandling där ak är kopplade till isotoper

Question 19

hur fungerar immunoliposomer?

Answer 19

antikroppar kopplade till lipidvesiklar innehållande läkemedel

ak binder till cell, vesikel tar sig in i cellen och släpper ut cytostatika

Question 20

hur används bispecifika antikroppar inom cancerterapi?

Answer 20

dessa behandlingar går ut på att två antikroppar konjugeras, där en binder till targetcellen och den andra binder till effektorceller ex. CD3 hos T-celler

-> avdödning av tumörcellen

Question 21

hur fungerar CAR-T-celler?

Answer 21

här så ersätts T-cellsreeptorn med en monoklonal antikropp mot tumörcellen

patientens T-celler skördas, genmodifieras och injicieras sedan tillbaka till patienten

Question 22

vad är problemen med monoklonal antikroppsterapi?

Answer 22

dessa är immunogena
kort halveringstid
för stora, vilket leder till att de inte alla gånger når fram till tumörcellen
dyrt
biverkningar
kan ej attackera intracellulära targets
låg response rate för vissa patienter av oklar anledning

Question 23

hur kan man göra antikropparna mindre i storlek? vad är fördelarna/nackdelarna?

Answer 23

kan antingen använda fragment t.ex. Fab-delen av Ak eller ännu mindre bitar dvs nanobodies

kan även använda sccFv (single chain fragment variable): proteinkedja som är veckad och liknar bindningssiten för Ig

fördelar: kan penetrera in i tumörer och komma åt svåra targetantigen

har dock kort halveringstid och lägre affinitet

Question 24

vad finns det för olika tekniker för att göra antikroppar mer humaniserade?

Answer 24

chimeric= varaibla delen från mus tsm med humana konstanta regioner

reshaped= hypervariabla delar från mus med humana variabla delar och konstanta regioner

helt humana= hybridom från transgena möss med humana Ig-gener

phage display libraries

Question 25

förklara fagdisplayteknik

Answer 25

bakteriofager innehållande humana Ig-gener tillsätts till platta med targetantigen

de bakteriofager med villis innehållande “rätt” antikropp kommer då binda till antigenen

dessa isoleras sedan och låts infektera E.coli bakterier som börjar producera rätt Ig-proteiner