Module 1 - Méthodes en virologie Flashcards
Quels sont les objectifs des méthodes en virologie ? (6)
(1) Confirmer une infection aigue (ex : grippe aviaire dans un poulailler)
(2) Vérifier la présence d’une infection latente ou persistante (vérification des dons de sang pour VIH, hépatites)
(3) Démontrer une immunité acquise (infirmière qui se coupe en traitant un patient Hépatite B +)
(4) Cultiver les virus pour des fins de recherche ou développement de virus
(5) Caractériser le virus (souche/mutant)
(6) Suivre l’évolution d’une infection (charge virale d’un patient atteint VIH)
Nommez 7 méthodes de diagnostic et caractérisation
(1) Symptôme clinique
(2) Microscopie des virions
(3) Microscopie des effets cytopathiques
(4) Western Blot
(5) Lateral flow immunoassay
(6) PCR quantitatif
(7) ELISA indirect
Comment les symptômes cliniques sont utiles dans le diagnostic d’un virus ?
Certaines infections ont des signes caractéristiques qui nous permettent de poser un diagnostique fiable. Ex : virus de l’herpès, virus de la peste.
Le mode de prélèvement chez l’individu dépend de quel facteur ?
Il dépend du système dans lequel le virus se reproduit. Par exemple, pour l’influenza, le prélèvement est fait dans le nasopharynx ou dans la gorge, alors que l’Ébola est diagnostiqué à partir du sérum.
Quels sont les 2 types de tests diagnostics ? que ciblent-ils ?
Test direct : pour la présence du virus
Test indirect : pour la présence des anticorps.
Décrivez comment la méthode de microscopie électronique pour observer les virions fonctionne.
Les virions sont enduits de métaux ou colorés, sans quoi il demeurent transparents.
Les spécimens doivent être séchés et fixés préalablement. On obtient que des observations « instantanées ». Permet de déterminer la symétrie de la capside de plusieurs virus.
Décrivez comment la méthode de microscopie électronique pour observer les effets cytopathiques fonctionne.
vérifier des caractéristiques particulières sur les cellules de l’hôte qui sont infectées par le virus. Ex : pour le cytomégalovirus (CMV), des inclusions nucléaires et cytoplasmiques sont observés, et chez l’herpès simplexe (HSV), les cellules semblent polynuclées.
Décrivez le fonctionnement d’un western blot.
Détection des antigènes viraux dans le sang, donc test direct. Il y a extraction de protéines de sang, ensuite, il y a migration du SDS-PAGE, puis transfert sur une membrane de détection avec des anticorps primaire et secondaire. Si la personne a le VIH, il y aura apparition d’une bande sur la membrane.
Décrivez le fonctionnement du Lateral flow immunoassay.
Les tests rapides de Covid-19 et de grossesse. fonctionnent selon ce principe. Détection
d’antigènes spécifiques dans l’échantillon, donc méthode directe.
Par diffusion, les particules virales vont progresser sur le test. Les AC en jaunes sont spécifiques à des AG de la COVID19. Les particules virales se fixe sur les AC spécifiques. La migration continue jusqu’à une autre couche d’AC spécifique au AG du virus. Quand les AG viraux déjà fixé au 1e AG, qui se fixent au 2e, génère une ligne bleu et une coloration si le test est positif. Portion des AC qui poursuivre et à la fin pour confirmer, AC en rouge pour le contrôle (s’attache à la tête bleu, et pas à la particule virale) et s’assure que le test a fonctionné.
**Pour test de grossesse, particule virale plutôt remplacé par hormone.
Avantage : rapide, peu couteux, pas besoin de professionnel qualifié pour le faire.
Décrivez le fonctionnement d’un PCR quantitatif.
Le PCR quantitatif détecte les acides nucléiques viraux. Ce test est très sensible et détecte la présence du virus même au tout début de l’infection. Des amorces sont utilisées et une réaction PCR amplifie les fragments, et un logiciel analyse les résultats. Parfois, il peut y avoir de l’amplification non spécifique, donc il faut être prudent.
Décrivez le fonctionnement du ELISA indirect.
Détection d’anticorps spécifiques contre le virus dans le sang d’un patient. Le fond du puit est tapissé d’antigènes (ex : AG du VIH), ensuite l’anticorps du patient (positif) se fixe à l’antigène. Ensuite, des anticorps secondaires synthétiques reconnaissent l’anticorps humain et s’y fixe, ce qui dégage une couleur indiquant que le test est positif.
Nommez les différentes culture de virus (5)
(1) Culture de cellule primaire
(2) Culture de lignées cellulaires continue
(3) Culture dans des oeufs fertilisés
(4) Essaie en plaque
(5) Essai quantal (endpoint dilutions)
Décrivez les avantages et inconvénients de la culture de cellules primaires.
Avantages des cellules primaires :
Détiennent les propriétés de cellules différenciées.
Répondent bien aux facteurs de croissances, aux modulateurs,…
Peuvent être réinjectées à l’animal.
Désavantages :
Culture fastidieuse (vérifier souvent la culture)
Temps de vie limité.
Décrivez les avantages et inconvénients de la culture de lignées cellulaires continues.
Désavantages des lignées cellulaires :
Ne permettent pas la culture de tous les virus.
Leurs caractéristiques diffèrent des cellules saines (non-cancéreuses).
Avantages des lignées cellulaires :
Culture facile, cellules immortelles.
Lignées humaines.
Pourquoi la culture dans les oeufs fertilisés est-elle avantageuse ?
Méthode qui a été décrite en 1931. L’embryon en développement fournit une variété de types cellulaires qui peuvent permettre la multiplication de différents virus (influenza, corona virus, etc.). Il est possible d’obtenir une quantité important de virus, à partir de peu de matériel et à peu de coûts. Méthode utilisée dans la production de vaccins contre la grippe.
