Modes chromatographiques Flashcards
Vrai ou faux
La phase mobile solvate les greffons de la phase stationnaire
Vrai
Quelles sont les interactions mises en œuvre dans les systèmes chromatographiques ?
Dipôle instantané -Dipôle instantané Dipôle permanent - Dipôle induit Dipôle permanent - Dipôle permanent Liaison hydrogène Liaison ionique
Quelle est l’énergie d’une interaction ionique ?
250 à 1050 kJ/mol
Quelle est l’énergie d’une interaction Dipôle instantané -Dipôle instantané ?
5 à 20 kJ/mol
Quelle est l’énergie d’une interaction Dipôle permanent -Dipôle induit ?
8 à 25 kJ/mol
Quelle est l’énergie d’une interaction Dipôle permanent -Dipôle permanent ?
25 à 40 kJ/mol
Quelle est l’énergie d’une liaison hydrogène ?
25 à 40 kJ/mol
Quels sont les paramètres mis en jeu et les modes chromatographiques pour les espèces moléculaires (ionisées possible) ?
Paramètre : polarité
Modes : adsorption ; partage polaire ; partage apolaire
Quels sont les paramètres mis en jeu et les modes chromatographiques pour les espèces ionisées ?
Paramètres : charge ; charge/polarité
Modes : échange d’ions ; paire d’ions
Quels sont les paramètres mis en jeu et les modes chromatographiques pour les espèces donneuses de doublets électroniques ?
Paramètre : formation de complexe
Mode : échange de ligands
Quels sont les paramètres mis en jeu et les modes chromatographiques pour les polymères ?
Paramètre : taille/forme
Mode : exclusion-diffusion
Quels sont les paramètres mis en jeu et les modes chromatographiques pour les énantiomères ?
Paramètre : structure 3D
Mode : chirale
Quel est le solvant le plus polaire en chromatographie ?
L’eau
Comment détermine t-on la polarité P’ de Snyder ?
Elle est calculée à partir de déterminations expérimentales (sans dimension)
Qu’est ce que la force éluante ɛ0 ?
Energie libre d’adsorption des molécules de solvant par unité de surface de silice
Sur quels critères sélectionne t-on un solvant ?
- Critère de miscibilité : les solvants doivent être miscibles
- Critère de « transparence » en détection : solvant qui donne le minimum de bruit de fond
- Critère de sélectivité : définit le choix des solvants de manière optimale
Vrai ou faux
Quand la phase stationnaire est polaire on utilise un solvant de base (phase mobile) apolaire et inversement
Vrai
Quels solvants pour la phase mobile utilise t-on pour un mode chromatographique adsorption et partage classique ?
Solvants sélectifs :
- éther isopropylique ou de méthyltertiobutyle (MTBE)
- chlorure de méthylène ou 1,2-dichloroéthane
- chloroforme
Solvant de base : alcanes (hexanes, isooctane)
Quels solvants pour la phase mobile utilise t-on pour un mode chromatographique partage à polarité de phases inversées ?
Solvants sélectifs :
- méthanol ou éthanol
- acétonitrile
- tétrahydrofuranne (THF)
Solvant de base : eau
Quel est le rôle des solvants sélectifs ?
Les solvants sélectifs permettent de moduler la rétention et la séparation. Ils rentrent en compétition avec le soluté
Pour séparer des espèces moléculaires en chromatographie de partage sur phases stationnaires polaires, quelle phase stationnaire utiliser ?
Silice greffée de motifs organiques polaires variés (support solide)
Quel est le mécanisme de rétention lors d’une séparation d’espèces moléculaires en chromatographie de partage sur phases stationnaires polaires ?
Solvatation des greffons polaires par le solvant le plus polaire de la phase mobile
Qu’est ce qu’une gaine de solvatation ?
C’est le liquide qui entoure le greffon
Quelle méthode est la plus utilisée pour séparer des espèces moléculaires ?
chromatographie à polarité de phases inversée dite chromatographie « inverse » : 80% des séparations par CL
Pour séparer des espèces moléculaires en chromatographie de partage sur phases stationnaires apolaires, quelle phase stationnaire utiliser ?
Plusieurs types de support hydrophobes
- Silices greffées de motifs apolaires variés (+++)
- Copolymères styrène-divinylbenzène greffés de motifs apolaires
- Oxyde de zirconium poreux greffés de motifs apolaires
- Carbone graphite poreux
Quels sont les problèmes majeurs du supports en silices greffées de motifs apolaires variés pour la séparation d’espèces moléculaires ?
- Présence de OH libres : silanols (Si-OH) résiduels à la surface : mécanisme d’adsorption parasite responsable de déformation de pic –> N cap : Élimination des silanols par traitement au triméthylchlorosilane (TMCS) = blocage des OH
- Gamme de pH de la phase mobile limitée au milieu basique : 2-8 (car la Si se dégrade dans un milieu trop acide) donc OH sous forme O- (silanoates) –> interactions hétérogènes très fortes –> déformation des pics importante
Que peut influencer les différents facteurs pour séparer des espèces moléculaires en chromatographie de partage sur phases stationnaires apolaires,?
- Phase stationnaire : rétention augmente avec la surface hydrocarbonée par unité d’aire qui dépend du taux de greffage et de la longueur de la chaine greffée
- Caractère hydrophobe du soluté : rétention augmente avec le coefficient de partage P entre eau et octanol
Comment s’effectue la séparation des espèces ionisées en chromatographie d’échange d’ions (chromatographie ionique) ?
Des particules sont greffées sur des groupements chargés qui sont anioniques ou cationiques. Si on greffe des groupements cationiques c’est pour séparer des anions –> échangeur d’anion. On parle d’échangeur de cation dans le cas inverse.
Pour séparer des espèces ionisées en chromatographie d’échange d’ions (chromatographie ionique) quelles phases stationnaires utiliser ?
Echangeurs d’ions
- Supports : silice ou copolymères
- Groupements fonctionnels
Pour séparer des espèces ionisées en chromatographie d’échange d’ions (chromatographie ionique) quelle phase mobile utiliser ?
Solution aqueuse (en général) tamponnée (tout le temps) contenant l’ion développeur (force éluante)
- Le pH de la phase mobile définit le degré d’ionisation de l’espèce si c’est un conjugué d’acide faible ou de base faible
- On rajoute des sels
Quel est le mécanisme de rétention pour la séparation des espèces ionisées en chromatographie d’échange d’ions (chromatographie ionique) ?
Il y a un effet de compétition entre les ions développeurs (échangeur de cations sous forme E+) qui est augmenté avec des ions divalents.
La concentration de l’ion développeur joue le rôle de la polarité des solvants en chromatographie de partage
Que peut influencer les différents facteurs pour la séparation des espèces ionisées en chromatographie d’échange d’ions ?
- Différence d’affinité entre C+ (cation injecté) et E+ (cation de la phase mobile)
- Concentration de E+ dans la phase mobile
- pH de la phase mobile
- Ionisation de l’espèce à analyser
Pour séparer des espèces ionisées en chromatographie de paires d’ions quelles phases stationnaires utiliser ?
Silice greffée alkyle (C8 ou C18)
Pour séparer des espèces ionisées en chromatographie de paires d’ions quelle phase mobile utiliser ?
Mélange hydro-organique (polarité de phases inversée) contenant un contre-ion hydrophobe anionique ou cationique
Quelle est la particularité de la chromatographie de paires d’ions ?
A la fois du partage et de l’échange d’ion avec ce mode chromatographique. Pour des composés de même charge, on peut les séparer en fonction de leur polarité et inversement.
Quel est le mécanisme de rétention pour séparer des espèces ionisées en chromatographie de paires d’ions ?
- Echange d’ions dynamique
- Partage
Que peut influencer les différents facteurs pour la séparation des espèces ionisées en chromatographie de paires d’ions ?
- Concentration et nature du contre-ion
- Proportion de solvant organique dans la phase mobile
- pH de la phase mobile
- Caractère hydrophobe des solutés
Quel est le mode chromatographique pour la séparation des espèces donneuses de doublets électroniques ?
Chromatographie d’échange de ligands
–> Formation de complexe entre un soluté donneur de doublets électroniques et un cation métallique présentant des orbitales vacantes
Pour séparer des espèces donneuses de doublets électroniques quelles phases stationnaires utiliser ?
gel de silice « cuivrée »
Pour séparer des espèces donneuses de doublets électroniques quelle phase mobile utiliser ?
eau-acétonitrile-ammoniaque
Quel est le mode chromatographique pour la séparation des polymères ?
Chromatographie d’exclusion-diffusion
- Filtration sur gel : séparation de biopolymères
- Perméation de gel : séparation des polymères de synthèse
Pour séparer des polymères quelles phases stationnaires utiliser ?
Polymères organiques ou minéraux (silice)
Pour séparer des polymères quelle phase mobile utiliser ?
- Filtration sur gel : solutions aqueuses tamponées
- Perméation de gel : phase organique (THF/ex)
Quel est le mécanisme de rétention pour séparer polymères ?
Les protéines qui ne rentrent pas dans les pores migrent dans le volume interstitiel (Vi). Les petites protéines peuvent aller dans l’ensemble des pores –> elles migrent plus lentement que les grosses protéines car elles migrent dans le Vi + Vp = VM
Les grosses protéines sortent à Vi, les moyennes entre les 2 et les petites à VM.
Quelle est la limite pour séparer des polymères ?
Si mélange de protéines de tailles différentes, on ne peut pas les séparer. On peut les séparer s’il y a adéquation entre taille des pores et taille des protéines à séparer.
Que peut influencer les différents facteurs pour la séparation des polymères ?
- Taille et forme du polymère analysé
- Composition de la phase mobile
- Diamètre des pores de la phase stationnaire
Quel est le mode chromatographique pour la séparation des énantiomères ?
Chromatographie chirale
Quelle est le mode le plus utilisé pour l’analyse énantiomérique ?
CLHP avec un sélecteur chiral immobilisé : PSC
Quels sont les avantages d’un sélecteur chiral immobilisé pour la séparation d’énantiomères ?
- Toutes les méthodes : CLHP, CCM, CPG, électrochromatographie
- Tous les sélecteurs chiraux
- Colonne réutilisable
Quel est le sélecteur conventionnel le plus employé pour séparer les énantiomères ?
Polysaccharides
