Fluorescence Flashcards
De quelles méthodes fait partie la fluorescence ?
Méthodes de luminescence
Quel est le principe ?
Méthode d’émission moléculaire immédiate consécutive à une absorption d’énergie photonique
Qu’est ce que le Diagramme de Jablonski ?
Il représente les états électroniques d’une molécule et les transitions entre ces états
Qu’est ce que le déplacement de Stokes ?
C’est la différence entre la position du pic du spectre d’absorption et celle du pic du spectre de fluorescence de la même transition électronique
Que peut-on conclure avec la loi de Stokes sur les longueurs d’onde maximales ?
λmaxExc < λmaxEm : la bande d’émission est décalée vers la droite par rapport à la bande d’excitation
Quel est le principe de la fluorescence anti-Stokes ?
λmaxExc > λmaxEm
Qu’obtient-on si la longueur d’onde de la lumière excitatrice s’éloigne du λmax ?
- Spectre d’émission de même “forme”
- Intensité de fluorescence diminue
Quelle est la durée de vie en fluorescence ?
1E-8 / 1E-9 s, émission quasi-immédiate
Qu’est ce que le rendement quantique Φ ?
Φ est une caractéristique de la substance, il permet de déterminer si elle est fluorescente. Une substance fluorescente a un Φ compris entre 0,1 et 1.
Si Φ = 0 : molécule non fluorescente
Quelle est la structure globale d’une molécule fluorescente ?
Molécules cycliques, rigides et possédant des liaisons π conjuguées (ex : benzène)
Quelle est l’influence de la rigidité d’une molécule sur son rendement quantique ?
Plus la molécule est rigide, plus le rendement est grand
Quelle est l’influence des groupements sur les aromatiques ?
- Donneurs d’électrons (NH2, OH…) : augmentation de la fluorescence
- Accepteurs d’électrons (NO2, COOH…) : diminution de la fluorescence
Quelle est l’absorbance mesurée généralement en fluorescence ?
0,05
Qu’est ce que le phénomène de filtre interne ?
Avant un certain point, plus on augmente la concentration, plus la lumière émise est forte. A partir de ce point, il y a tellement d’espèces dans la zone d’incidence que la lumière n’atteint pas les espèces du milieu
Vrai ou faux
Le phénomène d’auto-absorption est élevé
Faux, il est très faible
La lumière émise peut-elle être absorbée par les molécules non excitées ?
Oui à forte concentration
Que doit-on faire pour éviter les effets de filtre interne ?
La solution à analyser doit être très diluée
Vrai ou faux
La fluorescence est au moins 1000 fois plus sensible que l’absorption moléculaire
Vrai
Quelle est la sensibilité ?
dr/dC
Vrai ou faux
Un fluorophore est forcément un chromophore
Vrai
Vrai ou faux
L’émission est isotrope
Faux, elle se fait dans toutes les directions
De quoi est composé l’appareillage ?
Source - monochromateur - cuve - monochromateur - photomultiplicateur
Quel est le rôle du solvant ?
Il est neutre et ne transmet donc pas d’échange d’énergie
Quel est le phénomène le plus embêtant ?
Phénomène de diffusion de la lumière
Comment peut-on éliminer la lumière diffusée parasite ?
Changer de solvant = changer A
- si A est plus grand : on rentre + dans l’émission
- si A est plus petit : on peut supprimer l’interférence
S’il n’y a qu’un solvant pour une espèce, on change λ (moins de sensibilité mais moins de bruit de fond)
Qu’est ce qui crée la raie de diffusion Raman ?
Lorsque des molécules du solvant captent de la lumière : faible intensité
Comment varie la raie Raman si on décale la λ d’excitation ?
Elle se décale de la même façon (A=cste)
Qu’est ce qui crée la raie de diffusion Rayleigh ?
La longueur d’onde de la lumière diffusée est quasiment la même que celle de la lumière incidente
Quels peuvent être les phénomènes internes d’inhibition de la fluorescence ?
- Phénomène de filtre interne
- Photodécomposition
- Température
Comment varie la fluorescence en fonction de la température ?
La fluorescence diminue quand la température augmente
Qu’est ce qui entraine les phénomènes externes d’inhibition de fluorescence ?
Les quenchers
- Quenching dynamique : transfert d’énergie du fluorophore à l’espèce : diminution fluorescence
- Quenching statique : fluorophore proche d’une autre espèce
