Les Méthodes De L'histologie Moléculaire

Question 1

Que colore le PAS

Answer 1

le PAS colore en fushia les résidus glucidiques dans les réactions histochimiques classiques

Question 2

en histochimie classique,qu’est-ce qui est utilisé pour mettre en évidence les lipides neutres?

Answer 2

l’oil red O colore en rouge (sans rire mdr) les lipides neutres sur prélèvement frais ou congelés

Question 3

En histochimie classique qu’est-ce qui est coloré en bleu (de Prusse soyons précis sisi) et par quoi?

Answer 3

le fe3+ est coloré par le perls

Question 4

à quoi sert l’histo enzymologie?

Answer 4

permet la détection d’une activité endogène pas une réaction chromogene secondaire à la transformation d’un substrat par l’enzyme présente dans la cellule

Question 5

A quoi sert la phospatase acide ?

Answer 5

dans les réaction histo enzymo detecte et mersure l’activité lysosomale

Question 6

qu’est-ce qui est utilisé dans méthode histo enzymo pour mettre en évidence les cellules muscu striees squelettiques?

Answer 6

réaction oxydatives ou ATPasiques

Question 7

citez les techniques d’immuno histochimie

Answer 7

immuno Fluo, immuno enzymatique (classique,indirecte, sandwich), immuno électronique, avidine+biotine.

Question 8

les techniques d’immuno fluo sont-elles les meilleures Tech d’immuno histochimie ?

Answer 8

non car fluo éphémère, nécessité de tissus frais congelé, coupe faite à partir d’un microtome particulier qui est le cryostat et la conservation ne peut être faire que par microphotographies –> technique peu adaptée au diagnostic histo pathologique de routine d’où Dev d’autres techniques

Question 9

quel est le type de fluo dans technique immuno histo

Answer 9

UV visible au MO à fluorescence

Question 10

dans immuno enzymatique quelles sont les 2 enzymes les plus utilisées et avec quoi sont-elles couplées

Answer 10

peroxydase de raifort avec DAB -> produit brun phospatase alcaline /!\ à ne pas confondre avec phospatase acide qui est couplée avec le fasr red->produit rouge

Question 11

quelles sont les conditions pour que les réactions contenant peroxydase de raifort et phosphatase alcaline soient faites?

Answer 11

pour ce faire, les activités enzymatique naturelles ou endogènes doivent être bloquées peroxydase endogène bloquée par eau oxygénée (H2O2) phosphatase alcaline bloquée par levamisole

Question 12

Quel est l’inconvénient avec les méthodes enzymatique directes ?

Answer 12

Sensibilité souvent insuffisante qui est améliorée par amplification du signal (méthode indirect ou sandwich)

Question 13

Que font intervenir les méthodes immunoenzymatiques directes?

Answer 13

un 1er ac non couplé, reconnaissant ag tissulaire un 2eme ac couplé à l’enzyme et dirigé contre le fragment Fc du 1er ac

Question 14

la méthode immuno enzymatique indirecte implique-t-elle une réaction enzymatique utilisant un substrat chromogene?

Answer 14

yes. rappel: réaction chromogene= qui dégage de la couleur (Oui c’est chelou mais tu dois le savoir)

Question 15

vrai ou faux: Lors d’une méthode sandwich, l’un des ac est couplé à l’enzyme contre son fragment fab. justifier

Answer 15

FAUX!!! ARCHI FAUX!!! c’est le 3eme Ac qui est couplé pas un au hasard! (oui c’est bâtard mais gherardi on le connaît hein)

Question 16

comment sont désignées les méthodes sandwich? quelle est le nom de cette technique?

Answer 16

elles sont désignées selon la nature du complexe impliquant le 3eme Ac: technique de la peroxydase-antiperoxydase (PAP) et technique dite APPAP (alcaline phosphatase anti alcaline phosphatase)

Question 17

méthode sandiwh decrire les 3ac présents

Answer 17

le 1er non couplé reconnaissant Ag tissulaire le 2nd non couplé dirigé contre les fragment Fc du 1er et 3eme ac le 3eme Ac est de la même espèce que le 1er et est COUPLÉ à l’enzyme par son fragment fab

Question 18

quelle technique utilise l’immungold?

Answer 18

les réaction immuno électriques avec utilisation d’ac couplées à des microspheres d’or colloidal

Question 19

quelles sont les 2 méthodes possibles pour réaliser une technique immuno électrique?

Answer 19

soit avant l’inclusion (pre-embeding) soit après inclusion (post-embeding) ce qui implique une procedure spécifique différente de la technique classique de microscopie électronique

Question 20

c’est quoi la biotine? (oui le français est morr

Answer 20

la biotine est une petite vitamine hydrosoluble

Question 21

avec quoi se lie la biotine

Answer 21

l’avidine ou streptavidine, protéine bactérienne

Question 22

comment peut-on qualifier la liaison biotine avidine

Answer 22

haute affinité et grande spécificité

Question 23

comment peuvent être effectuées les méthodes d’immuno-histo

Answer 23

soit en MO ou ME, sur frottis cellulaires, coupe au cryostat de matériel congelé ou sur coupes de matériel inclus

Question 24

comment augmenter la sensibilité des tests immuno histo?

Answer 24

-soit visant à dévoiler des Ag masqués (digestion enzymatique par protéase comme la trypsine ou par altération de la structure spatiale des protéines par chauffage au micro-ondes -soit permeabilisation des membranes cytoplasmiques et nucléaire par l’utilisation du tritonX-100 =détergent non ionique qui permet la dissolution des phospholipides membranaires -amplification des édifices moléculaires dans la méthode sandwich.

Question 25

Que désigne-t-on par Ac polyclonaux

Answer 25

ac produit par immunisation d’un animal

Question 26

Que désigne-t-on par Ac monoclonax

Answer 26

ac monoclonaux obtenus par la technique des hybridomes

Question 27

quelle est la spécificité et la sensibilité des ac monoclonaux par rapport aux polyclonaux

Answer 27

ac mono moins sensibles mais plus spécifique

Question 28

citez 2 lectines et leur rôle

Answer 28

concanavaline reconnaît alpha-mannose peanut agglutinin reconnaît certains gangliosides

Question 29

à partir de quoi est effectué l’hybridation in situ?

Answer 29

frottis cellulaires et coupes histologiques

Question 30

quel est le rôle de l’hybridation in situ?

Answer 30

détection et localisation precise de séquence d’acides nucleiques dans les cellules ou tissus

Question 31

quel est la taille des sondes utilisées lors de l’hybridation in situ?

Answer 31

petite, constituée d’acides nucleiques synthetique de 20 à 50 nucléotides

Question 32

par quou est effectuée le marquage des isotopes radioactifs dans HIS?

Answer 32

sondes chaudes

Question 33

dans quel cas on utilise sonde froide dans HIS ?

Answer 33

produits non radioactifs

Question 34

comment se fait la révélation par HIS?

Answer 34

autoradiographie sonde chaudes, méthodes semblables à immuno histo en sonde froide

Question 35

pourquoi la PCR in situ est très compliquée à mette en place?

Answer 35

associé extrême sensibilité de l’amplification de PCR et les techniques de localisation cellulaires de l’ISH

Question 36

Quels sont les methodes d’histologie moleculaire classique ?

Answer 36

Methodes histologie molec classique :

• réaction histochim
• réaction histoenz
• techiniques immuno histochim
• ( lectinocytichimie )
• hybridation in situ
• marquages multiples

Question 37

Comment sont mise en evidence les molecules lors de réaction histochim classique ?

Answer 37

mise en evidence des molec par des réaction chim simple –> colorations spéciales

Question 38

sur quoi se basent les techniques d’immunohistochim ? Et sur quoi peuvent elles s’appliquer ?

Answer 38

Immuno histochim = basé sur reconnaissance AG/AC –> peut s’applique aux cellules et a la microsco electronnique

Question 39

Quels anticorps sont utilisé en immunohistochimie ?

Answer 39

Anticorps =
POLYCLONAUX ( apres immuniqation d’un animal )
ou
MONOCLONAUX (par technique des hybridomes)
==> AC monoclonaux = + sélectif MAIS - sensibles

Question 40

Sur quoi se basent les techniques d’immuno fluorescence ?

Answer 40

Immunofluo se base sur couplage AC a un produit fluorescent ( = fluorochrome ) –> localisation site réaction AG/AC en MO a fluo (UV)