Les Méthodes De L'histologie Moléculaire Flashcards
Que colore le PAS
le PAS colore en fushia les résidus glucidiques dans les réactions histochimiques classiques
en histochimie classique,qu’est-ce qui est utilisé pour mettre en évidence les lipides neutres?
l’oil red O colore en rouge (sans rire mdr) les lipides neutres sur prélèvement frais ou congelés
En histochimie classique qu’est-ce qui est coloré en bleu (de Prusse soyons précis sisi) et par quoi?
le fe3+ est coloré par le perls
à quoi sert l’histo enzymologie?
permet la détection d’une activité endogène pas une réaction chromogene secondaire à la transformation d’un substrat par l’enzyme présente dans la cellule
A quoi sert la phospatase acide ?
dans les réaction histo enzymo detecte et mersure l’activité lysosomale
qu’est-ce qui est utilisé dans méthode histo enzymo pour mettre en évidence les cellules muscu striees squelettiques?
réaction oxydatives ou ATPasiques
citez les techniques d’immuno histochimie
immuno Fluo, immuno enzymatique (classique,indirecte, sandwich), immuno électronique, avidine+biotine.
les techniques d’immuno fluo sont-elles les meilleures Tech d’immuno histochimie ?
non car fluo éphémère, nécessité de tissus frais congelé, coupe faite à partir d’un microtome particulier qui est le cryostat et la conservation ne peut être faire que par microphotographies –> technique peu adaptée au diagnostic histo pathologique de routine d’où Dev d’autres techniques
quel est le type de fluo dans technique immuno histo
UV visible au MO à fluorescence
dans immuno enzymatique quelles sont les 2 enzymes les plus utilisées et avec quoi sont-elles couplées
peroxydase de raifort avec DAB -> produit brun phospatase alcaline /!\ à ne pas confondre avec phospatase acide qui est couplée avec le fasr red->produit rouge
quelles sont les conditions pour que les réactions contenant peroxydase de raifort et phosphatase alcaline soient faites?
pour ce faire, les activités enzymatique naturelles ou endogènes doivent être bloquées peroxydase endogène bloquée par eau oxygénée (H2O2) phosphatase alcaline bloquée par levamisole
Quel est l’inconvénient avec les méthodes enzymatique directes ?
Sensibilité souvent insuffisante qui est améliorée par amplification du signal (méthode indirect ou sandwich)
Que font intervenir les méthodes immunoenzymatiques directes?
un 1er ac non couplé, reconnaissant ag tissulaire un 2eme ac couplé à l’enzyme et dirigé contre le fragment Fc du 1er ac
la méthode immuno enzymatique indirecte implique-t-elle une réaction enzymatique utilisant un substrat chromogene?
yes. rappel: réaction chromogene= qui dégage de la couleur (Oui c’est chelou mais tu dois le savoir)
vrai ou faux: Lors d’une méthode sandwich, l’un des ac est couplé à l’enzyme contre son fragment fab. justifier
FAUX!!! ARCHI FAUX!!! c’est le 3eme Ac qui est couplé pas un au hasard! (oui c’est bâtard mais gherardi on le connaît hein)
comment sont désignées les méthodes sandwich? quelle est le nom de cette technique?
elles sont désignées selon la nature du complexe impliquant le 3eme Ac: technique de la peroxydase-antiperoxydase (PAP) et technique dite APPAP (alcaline phosphatase anti alcaline phosphatase)
méthode sandiwh decrire les 3ac présents
le 1er non couplé reconnaissant Ag tissulaire le 2nd non couplé dirigé contre les fragment Fc du 1er et 3eme ac le 3eme Ac est de la même espèce que le 1er et est COUPLÉ à l’enzyme par son fragment fab
quelle technique utilise l’immungold?
les réaction immuno électriques avec utilisation d’ac couplées à des microspheres d’or colloidal
quelles sont les 2 méthodes possibles pour réaliser une technique immuno électrique?
soit avant l’inclusion (pre-embeding) soit après inclusion (post-embeding) ce qui implique une procedure spécifique différente de la technique classique de microscopie électronique
c’est quoi la biotine? (oui le français est morr
la biotine est une petite vitamine hydrosoluble
avec quoi se lie la biotine
l’avidine ou streptavidine, protéine bactérienne
comment peut-on qualifier la liaison biotine avidine
haute affinité et grande spécificité
comment peuvent être effectuées les méthodes d’immuno-histo
soit en MO ou ME, sur frottis cellulaires, coupe au cryostat de matériel congelé ou sur coupes de matériel inclus
comment augmenter la sensibilité des tests immuno histo?
-soit visant à dévoiler des Ag masqués (digestion enzymatique par protéase comme la trypsine ou par altération de la structure spatiale des protéines par chauffage au micro-ondes -soit permeabilisation des membranes cytoplasmiques et nucléaire par l’utilisation du tritonX-100 =détergent non ionique qui permet la dissolution des phospholipides membranaires -amplification des édifices moléculaires dans la méthode sandwich.
