Laboratoire questions Flashcards
À quoi sert le bec de bunsen?
Il sert à produire de la chaleur et il sert à stéréliser. Il fonctionne en créant une flamme de chaleur bleue qui créer un mouvement de convection qui empêche les retombées de poussières et de germes. Il y a donc une création d’une zone stérile de 20 cm de diamètre environ.
Pour l’identification de matériels au laboratoire comment doit-on procéder s’il s’agit d’une gélose? D’un tube?
S’il sagit d’une gélose identifier au fond de la boîte de pétri. S’il s’agit d’un tube identifier au pourtour en haut du tube. On devrait retrouver les informations suivantes : Nom de la culture ou l’origine de l’échantillon, date, Nom du manipulateur, Numéro d’équipe et de groupe
Comment devrais-t-on ranger les géloses?
On devrait les ranger avec le couvercle vers le bas, pour ne pas que la condensation qui se forme puisse retombée dans le milieu de culture et le contaminer
Comment prépare-t-on un frottis sur une lame? Décrire l’ensemble des étapes.
- Identifier la partie appropriée de la lame avec un crayon plomb
- Ajouter une goutte d’eau au centre de la lame
- Flamber l’anse de platine jusqu’à ce que le bout soit rouge
- Refroidir l’anse dans le pourtour de la gélose
- Prélever une partie d’une colonie isolée
- Mélanger les bactéries avec la goutte d’eau
- Flamber l’anse de platine et la remettre dans son socle
- Laisser sécher la goutte d’eau à l’air
- Fixer le frottis en passant délicatement et rapidement la lame 2-3 fois au-dessus de la flamme. La lame devrait être pas trop chaude et tolérable sur la main du manipulateur
Que peut-on faire après avec le frottis fixer sur la lame?
On peut soit colorer la lame avec une technique spéciale et ensuite on peut en déduire soit ses constituants selon la méthode de coloration (ex. Gram) ou on peut faire une évaluation de la quantité de bactéries sur le frottis
1 bactérie/champ = 1+
2-4 bactéries/champ = 2+
5-20 bactéries/champ = 3+
plus de 20 bactéries/champ = 4+
Quelles sont les étapes pour faire un prélèvement d’un bouillon et l’inoculation d’un bouillon?
- Stériliser l’anse de platine et garder près de la flamme
- Flamber l’orifice du tube contenant le bouillon de bactéries
- Mettre la culture en suspension et plonger l’anse dans le tube
- Flamber l’orifice du tube contenant les bactéries et reboucher celui-ci
- Flamber l’orifice du tube stérile
- Plonger l’anse de platine avec bactéries dans le tube stérile
- Flamber l’orifice du tube inoculé
- Stériliser l’anse de platine
- Terminer ; replacer le matériel au bon endroit
Quelles sont les étapes pour faire un prélèvement d’une gélose et l’inoculation d’une gélose? (Méthode des 3 séries stries)
La méthode des 3 séries de stries. Le but est d’obtenir des colonies isolées en diminuant la concentration des bactéries à chaque quadrant de la gélose. Ainsi, on commence en dessinant un T sous la gélose pour nous servir de guide.
- Flamber l’anse de platine
- Refroidir l’anse dans un coin de la gélose
- Prélever une colonie isolée de la gélose
- Déposer l’anse avec les bactéries sur la gélose nouvelle dans le premier quadrant
- Effectuer une série de stries serrées jusqu’à la moitié en s’assurant de ne pas revenir en arrière
- Flamber l’anse de platine
- Refroidir l’anse dans un coin
- Effectuer une 2ième série de stries en passant 2 fois de façon perpendiculaire, par dessus la première série de stries et ensuite faire les stries collées jusqu’à la ligne de guide
- Flamber l’anse de platine
- Effectuer une 3ième série de stries en passant 2 fois dans le deuxième quadrant de façon perpendiculaire et après faire des stries collées jusqu’à la fin de la gélose la ligne en guide
- Flamber l’anse de platine
- Terminé
Quelles sont les étapes pour faire un prélèvement à partir d’un échantillon et inoculation d’une gélose? (méthode des 4 séries de stries)
La méthode des 4 séries de stries permet de déterminer de façon relative la quantité de bactéries présentes dans un échantillon. N’est pas adéquate pour le repiquage de bactéries à partir d’un bouillon ou de colonies. Idéale pour l’isolement de bactéries à partir d’un spécimen clinique. ATTENTION ON NE DOIT PAS FLAMBER L’ANSE DE PLATINE ENTRE LES STRIES.
- Effectuer le prélèvement à partir d’un écouvillon stérile
- Effectuer un petit cercle dans un coin de la gélose à l’aide de l’écouvillon
- Flamber l’anse de platine
- Refroidir l’anse de platine dans un autre coin
- Déposer l’anse sur l’endroit inoculé
- Effectuer une première série de stries
- Tourner la gélose à 90 degrés et effectuer une seconde série de stries
- Tourner la gélose à 90 degrés et effectuer une troisième série de stries
- Tourner la gélose à 90degrés une dernière fois et effectuer une quatrième et dernière série de stries
- flamber l’anse de platine et remettre dans son socle
Comment interpréter la méthode des 4 stries pour les colonies et la croissance?
Si plus grand ou égal à 5 colonies dans le quadrant : 1 = + 2 = ++ 3 = +++ 4 = ++++
Quelles sont les étapes d’un prélèvement de bactéries à partir d’un tissu infecté?
- Flamber la spatule préalablement trempée dans l’éthanol
- Stériliser la surface du tissu
- Flamber le bistouri préalablement trempée dans l’éthanol
- Inciser le tissu
- Prendre un écouvillon stérile et prélever le tissu
- Inoculer une gélose en effectuant un cercle près du pourtour de la gélose
- Effectuer un frottis sur une lame de microscope aussi possible
pourquoi doit-on colorer et observer les bactéries sous un microscope à immersion?
Puisque les bactéries offrent peu de contraste et sont de petites tailles.
Que permet la coloration de Gram?
Elle permet de différencier les bactéries Gram+ des Gram- grâce aux différences qui existent au niveau de leur paroi cellulaire
Que permet la fixation des bactéries sur la lame avant de les colorer?
Elle permet de faire adhérer les bactéries sur la lame tout en les tuant, en coagulant leur cytoplasme. Cette méthode permet de préserver intact leurs formes et leurs structures
Quelles sont les étapes pour effectuer une coloration de Gram?
- Premièrement il faut fixer les bactéries sur la lame désirée et ce avec les étapes de fixation de bactéries sur lame
- Il faut préparer les colorants et mettre le tout au dessus du lavabo.
- Il faut commencer en mettant du colorant violet (basique) - crystal violet et bicarbonate de soude (égale portion), et ce, pour 30 secondes en immergeant la lame complètement.
- Ensuite, on rince la lame dans l’eau et on met du colorant mordant - iode (ce qui intensifie le violet crystal) et ce pour 30 secondes
- Ensuite on rince la lame et on met du décolorant ou de l’alcool-acétone et ce pour 5-10 SECONDES
- Ensuite on rince la lame et on met du colorant de contraste pour mettre en évidence les gram - qui étaient devenus incolore par le décolorant - fuschine-basique et pour 15 secondes
- Finalement on éponge la lame avec un papier buvard et puis on regarde sous le microscope
Quel est le rôle de l’étape du décolorant ou alcool-acétone?
Cela permet de détruire la membrane externe des bactéries Gram - et donc ils deviennent dès lors incolore et le colorant peut partir de la lame avec l’eau
Si on veut observer la motilité d’une bactérie, va-t-on utiliser la méthode de coloration de Gram?
Non car une coloration tue les bactéries au préalable et donc on ne peut plus oberserver la motilité. Il faut donc utiliser la technique de contraste (microscope à fond noir) avec le sujet entre lame et lamelle.
Quelle technique utilise-t-on pour obtenir des colonies isolées sur gélose?
La méthode en 3 stries pour épuiser l’inoculum.
Quelles informations peut-on obtenir sur une gélose ou sur un bouillon de bactéries?
a) Taille de la colonie (plus petit ou égal à 1mm = petite, moyenne = entre 1 et 3 mm, grosse 3mm et plus)
b) Surface (lisse, rugueuse, mucoïde ou sèche)
c) Forme (circulaire, irrégulière ou rhizoïde)
d) Élévation (plane, convexe ou bossue)
e) Couleur de la colonie ou présence de pigment
f) Odeur
g) Hémolyse
Dans les bouillons nutritifs, la croissance bactérienne se démontre par la turbidité du milieu
Décrire les résultats de l’hémolyse que l’on pourrait observer en microbio?
Hémolyse
gamma = aucune hémolyse et aucun GR endommagé donc gélose normal alpha = hémolyse incomplète des GR donc zone verdâtre autour des GR (réduction de l'hémoglobine en methhémoglobine) bêta = hémolyse complète des GR donc zone clair et pâle autour
Quel est le but de la conservation des bactéries?
Le but premier de la conservation des bactéries est de maintenir une souche bactérienne vivante, non-contaminée et sans variations ou mutations, donc aussi près que possible de l’isolat original
Quelles sont les méthodes de conservation à court terme? À long terme?
À court terme :
- repiquage : transfert périodique dans un milieu frais (intervalle entre les transferts varie selon les bactéries)
- congélation : On congèle les bactéries à -70degrés dans un milieu cryoprotecteur. Survie de 6 mois à 3 ans.
À long terme :
Lyophilisation : Jusqu’à 30 ans. Ce processus permet d’enlever l’eau des suspensions bactériennes congelées par sublimation sous pression réduite ; eau évaporée sans passer par l’état liquide. On obtient alors une poudre bactérienne qui peut être réhydratée par l’ajout d’un milieu frais.
