labo 9

Question 1

Lors de vos observations microscopiques, remplissez le tableau suivant et procédez à
l’identification de votre inconnu.

Answer 1

S. aureus : Mauve, Positif (+), coque, Non baveux

E. coli : Rose, Négatif (-), bacille, Baveux

Question 2

. Quel est le principe de la coloration de Gram ?

Answer 2

a) On traite le frottis par une coloration primaire de violet de gentiane qui permet de colorer toutes les bactéries sans discrimination.

b) Après un bon lavage, on applique sur la préparation une solution d’iode qui sert de mordant. L’iode permet au violet de gentiane d’adhérer aux
structures bactériennes (surtout le cytoplasme).

c) Après un second lavage, pour enlever le surplus d’iode, on utilise une solution décolorante (éthanol 95%) qui enlève la coloration violette sur certaines espèces bactériennes et pas sur d’autres. En réalité, la solution décolorante dissous les lipides de la paroi de bactéries de type Gram -.

d) Après un troisième lavage, pour enlever le surplus de décolorant, on applique de la safranine (contre-colorant) sur le frottis afin de colorer les bactéries ayant perdu leur coloration violette. Un contre-colorant sert à colorer des cellules qui ont perdu leur coloration primaire suite à
l’utilisation d’un décolorant.

À la fin du processus, les bactéries de type Gram + sont colorées en violet tandis que les bactéries Gram- sont colorées en rose.