Labb 1

Question 1

Hur går du tillväga för att klona ett DNA-fragment i e.coli och bestämning av dess bassekvens? (beskriv översiktligt)

Answer 1

För att klona in λ-DNA i pUC 8 måste båda DNA-molekylerna

klyvas med samma restriktionsenzym och sedan ligeras ihop till olika rekombinanta DNA-molekyler, dvs pUC8-plasmider med λ-insert. Dessa transformeras in i E coli-bakterier, som gjorts kompetenta genom kalciumkloridbehandling. Bakterierna odlas sedan ut på agarplattor innehållande ampicillin, IPTG (imiterar alolaktos) och X- gal (monolog till laktos). Man kan då se vilka bakterier som tagit upp plasmid med λ-DNA som insert och vilka som tagit upp enbart

plasmid utan insert. Några av de bakteriekolonier, som

innehåller plasmid med insert odlas upp i LB - buljong,

plasmiden renas fram och insertet sekvenseras och identifieras.

Question 2

Plasmiden, pUC 8, består av 2700 bp. Den har en laktamasgen, vad tillför den till sin värdcell?

Answer 2

ampicillin resistens

Question 3

Plasmiden, pUC 8 har en bit av lac-operonet i sitt DNA. Va uttrycker den om inte något insert förts in i plasmiden?

Answer 3

β-galaktosidas

Question 4

Isopropyltiogalaktosid (IPTG), är en:

Answer 4

stark induktor till lac-operonet

.

Question 5

X-gal är en ______, som kan hydrolyseras av ______ till ____ och _______

Answer 5

X-gal är en färglös galaktosid, som kan hydrolyseras av B- galaktosidas till galaktos och en blåfärgad produkt.