Interpretação do Diagnóstico Laboratorial de Micobactérias

Question 1

Como se colhe sangue?

Answer 1

Para tubos com heparina

Question 2

Numa exploração, para além do teste intradérmico, que outro se pode fazer para imunidade celular?

Answer 2

Interferon gama

Question 3

Como se faz o testes do interferon gama?

Answer 3

Para fazer o teste do interferão γ, devem colher entre 7 a 8mL de sangue, em heparina.
Os linfócitos T, presentes no sangue, são estimulados com as PPD (Purified Protein Derivate); as amostras de sangue são divididas em 3 poços – um poço para M. aviário, outro para M. bovino e outro para PBS (cada poço tem 1,5mL). As placas de poços “repousam” 16 a 24h e:
 Se as células nunca tiverem tido um contato prévio, não há produção de mediadores inflamatórios.
 Já tiverem tido contato prévio, há produção de mediadores inflamatórios.
Para testar a reação das células T colhe-se o sobrenadante (onde estão os produtos da inflamação), por centrifugação. O sobrenadante é testado por ELISA direto, para antigénio – neste ELISA tem um anticorpo monoclonal, associado à placa, ao qual se vai ligar o antigénio (neste caso, o IFNγ). Existe um segundo anticorpo, associado a uma enzima, que se vai ligar a este complexo e, quando se adiciona o substrato da enzima, há a coloração do ELISA.

Question 4

Amostra, meio de cultura, quanto tempo demora a crescer?

Answer 4

O material colhido, de excelência, são as fezes – que são muito contaminadas. Faz-se crescer em meio Herrold’s, enriquecido com micobactina, para promover o crescimento apenas de Mycobacterium. Sendo um agente fastidioso, o seu crescimento demora entre 2 a 3 meses.

Question 5

Vantagens e desvantagens do teste do interferon gama?

Answer 5

VANTAGENS
 > sensibilidade
 Antecipação - 15-90 dias
 Método estandardizado
 Sem período refractário (vs
42-60 d.) - t. paralelo
 Condição Corporal
 Uma única contenção do
animal

DESVANTAGENS
Estimulação após 8 h(logística).
Custo
Resposta deprimida por:
 Parto (4 sem.)
 corticosteroides (1 sem.)

Question 6

O teste do interferon gama é um bom método para fazer em paralelo com o teste intradérmico?

Answer 6

O teste da tubercolina, em conjunto com o teste IFNγ aumenta a especificidade, pelo que os dois testes devem ser
utilizados paralelamente.

Question 7

Em que situações é útil fazer o teste do interferon gama ?

Answer 7

 Nas explorações não indemnes de tuberculose bovina que apresentem animais duvidosos à prova da IDC
 Com o objetivo de evitar o abate total, nas explorações que apresentem sucessivamente animais positivos à
prova de intradermotuberculinização (positividade crónica)
 Nas explorações com qualquer classificação sanitária desde que apresentem uma percentagem significativa
de animais positivos a uma única prova de intradermotuberculinização.

Question 8

Caso 1 da spoligotipagem (página 6 da sebenta prática)
Como podemos ter a certeza que o surto teve origem na exploração C? O que fariamos se fosse ubiquo?

Answer 8

Era um spoligotipo raro, se fosse ubiquo tinha de se abater na mesma

Question 9

Quais as diferenças entre a spoligotipagem e o Miru

Answer 9

Mycobacterium Interspersed Repetitive Units (MIRU) são sequências repetidas em tandem, dispersas pelo genoma em regiões intergénicas. Algumas dessas sequências apresentam polimorfismos no número das repetições em
tandem – Variable Number of Tandem Repeats (VNTR). A tipificação molecular baseia-se na análise destes polimorfismos e portanto, na determinação do
número de repetições em tandem nestes loci.
Este teste é mais transversal, podendo ser utilizado noutros agente

A spoligotipagem baseia-se na deteção da presença ou ausência de spacers, localizadas na região de repetição directa (DR – Direct repeat) das
micobactérias. Esta técnica permite rastrear e comparar genótipos, existentes na base de dados internacional.
A região DR é específica para as micobactérias responsáveis pela tuberculose. Esta região apresenta polimorfismo (ou seja, diferentes números de repetições) e as diferentes espécies bacterianas do complexo M. tuberculosis
apresentam diferente número de DR, pelo que, através da Spoligotipagem, podem ser identificadas as estirpes de um
dado foco da doença.

Question 10

Caso 2 (página 6 da sebenta prática) Qual a vantagem da spoligotipagem naquele caso? Porque é que era possível tirar essa conclusão? Era possível fazer spoligotipagem para paratuberculose?

Answer 10

Com a spoligotipagem, percebeu-se que o agente que provocou o foco em 1998/99 foi o mesmo agente que levou ao
abate dos animais da exploração E, em 1992. O agente manteve-se em equilíbrio nos animais da exploração B, infectaram os animais da exploração A e foi detectado. Sem spoligotipagem, podia pensar-se que se tratava de um outro agente, uma nova infecção.

Porque era um spoligotipo raro

Sim

Question 11

Como é que podemos diferenciar um caso de tuberculose de paratuberculose

Question 12

Amostra para paratuberculose e que teste?

Answer 12

Detetamos Ac antes das bactérias nas fezes (só as detetamos quando já há sinais clínicos).

Question 13

Cuidados a ter se quisermos fazer uma base de dados de spoligotipos tendo poucos recursos

Answer 13

Abranger muitas espécies
Abranger várias regiões
Apontar as datas

Question 14

O que fazer quando temos spoligotipo mais frequente?

Answer 14

MIRU para aprofundar