Immunotechniques

Question 1

Qu’est-ce que le «titre» de l’antisérum (ou anticorps)?

Answer 1

Inverse de la plus grande dilution donnant une réaction positive
Concentration minimale avec laquelle on obtient encore une réaction positive dans un essai
(Titre dépend complètement de l’essai : la même préparation d’Ac va donner des tittres différents dans des essais différents)

Question 2

Que permet de déterminer le titre?

Answer 2

Permet de déterminer l’efficacité des anticorps ou de l’antisérum

Question 3

Décrire le test de l’hémagglutination.

Answer 3

Globules rouges se déposent différemment dans le puits selon si ils sont agglutinés ou pas : si ils sont agglutinés, ils prennent plus d’espace : test positif (les anticorps se lient aux antigènes des globules rouges)

Question 4

Décrire le test d’hémagglutination pour le test pour antisérum.

Answer 4

Sert à savoir si une personne détient les anticorps pour un pathogène particulier dans son sérum
Ex : récepteur d’acide sialique sur globules rouges : liaison avec virus de l’influenza : agglutination
Sérum personne vaccinée : anticorps anti-influenza neutralisent le virus : pas d’hémagglutination

Question 5

Décrire le latex agglutination test.

Answer 5

Billes de latex couplées à Ag : si présence d’Ac contre Ag : agglutination

Question 6

Qu’est-ce qu’un anticorps primaire?

Answer 6

Anticorps contre une cible donnée (tête chercheuse)

Question 7

Qu’est-ce qu’un anticorps secondaire?

Answer 7

Ac anti-anticorps : amplifie la réponse primaire, car on peut en coller un grand nombre et/ou on peut coller une molécule qui permet de le suivre

Question 8

Nommer les outils courants dans les anticorps.

Answer 8

Anticorps primaires et secondaires
Anticorps couplé à un agent coloré ou fluorescent
Anticorps couplé à un enzyme dont l’activité peut être mesurée

Question 9

Décrire le fonctionnement d’un immunobuvardage de type Western.

Answer 9

1 - on met du lait en poudre : blocage de la membrane par des protéines non spécifiques
2 - on met Ac contre Ag XYZ
3 - Lavage
4 - on met un 2e Ac (anti-Ig) couplé à un enzyme ou un fluorophore
5 - Révélation

Question 10

À quoi sert un radio-immunoessai (RIA)?

Answer 10

Sert à quantifier des protéines

Question 11

Décrire le principe du RIA.

Answer 11

On incube Ac avec une quantité fixe de l’Ag radiomarqué et une quntité croissante de l’Ag non-marqué dans une série de tubes : Ag non-marqué entre en compétition avec Ag marqué –> courbe d’étalonnage
Mesure quantité d’Ag non connue à partir de la courbe étalon

Question 12

Quel Ag sert de référence pour faire la courbe étalon dans le RIA?

Answer 12

Ag pur non-marqué en quantité connue

Question 13

Qu’est-ce qui est requis pour faire un RIA?

Answer 13

1 - Ac spécifique à Ag fixé à un substrat solide
2 - Ag pur et radiomarqué
3 - Ag pur non-marqué en quantité connue
4 - Échantillon à analyser

Question 14

Qu’est-ce qui indique la quantité d’Ag qu’on cherche dans le RIA?

Answer 14

Le degré de compétition de l’Ag contre l’Ag radiomarqué

Question 15

Si la dilution maximale ou j’ai une réaction positive avec un Ac est de 1/100, quel est le titre de cet anticorps?

Answer 15

100

Question 16

Comment fonctionne un ELISA?

Answer 16

Couplage d’un enzyme à un Ac
Ag fixé sur support solide (très hydrophobique, donc Ag se lie dessus)
1 - Ajout d’un Ac primaire et lavages
2 - Ajout d’un Ac secondaire et lavages
3 - Ajout d’un substrat que l’enzyme transforme (réaction quantifiable)

Question 17

Comment fonctionne un ELISA en sandwich?

Answer 17

Ac XYZ sur un support solide
1 - Ajout d’un extrait cellulaire avec la protéine XYZ (différentes dilutions) et lavages
2 - Ajout de l’Ac couplé (reconnaît un épitope différent sur Ag)
3 - Ajout substrat que l’enzyme transforme : réaction quantifiable

Question 18

Que veulent dire les lettres de ELISA?

Answer 18

Enzyme-linked immunoadsorbant assay

Question 19

Un ELISA peut-il être utilisé pour quantifier des anticorps?

Answer 19

Oui, par exemple pour confirmer la présence d’anticorps contre un pathogène

Question 20

Décrire le fonctionnement d’un ELISA servant à confirmer la présence d’un Ac contre un pathogène.

Answer 20

1 - Purification d'un Ag du pathogène
2 - Attachement à un support solide
3 - Ajouter dilutions du sérum du patient
4 - Lavages et ajout d'un Ac secondaire
5 - Réaction

Question 21

Qu’est-ce que l’immunofluorescence?

Answer 21

Approche qui ajoute à un anticorps :
- une molécule colorée (chromophore) ou
- une molécule fluorescente
Ac reconnaissent différentes structures et émettent de la couler/fluorescence)

Question 22

Qu’est-ce que la fluorescence?

Answer 22

Absorption d’un photon d’une certaine l.o. et la réémission d’un photon d’une l.o. plus longue (moins énergétique)

Question 23

Quelle est la différence entre l’immunofluorescence primaire et secondaire?

Answer 23

Primaire : molécule fluorescente sur un Ac primaire

Secondaire : sur Ac secondaire

Question 24

Qu’est-ce que le FACS?

Answer 24

Fluorescence-activated cell sorting
Sépare les molécules selon si elles fluorescent ou non
Laser pointe lumière sur cellule possiblement liée à fluorophore : si cellule a fluorophore et est excité par lumière : séparée des autres cellules par des électroaimants

Question 25

Comment présente-t-on les données d’un FACS en une dimension?

Answer 25

Histogramme : graphique avec des pic aux longueurs d’ondes qui fluorescent

Question 26

Comment présente-t-on les données d’un FACS en deux dimensions?

Answer 26

Graphique avec nuage de points : si deux fluorophores : deux «spots» de points
Points entre les deux spots de points = artéfacts

Question 27

Décrire le principe de l’immunoprécipitation.

Answer 27

Support solide (bille qui peut sédimenter, bille agarose par exemple) lié à anticorps spécifique à une molécule par un couplage à protéine A ou G qui lie Fc
On va à la pêche : bille lie Ag d'intérêt par interaction Ac-épitope : immobilisation de l'Ac : Lavage : Séparation avec Ac secondaires anti-Ac liés à plaque aimantée --> séparation, les billes restent dans fond de la plaque

Question 28

Comment fonctionnent les «dip-sticks»?

Answer 28

Ag posé sur bout de la plaque : voyage vers autre bout par capillarité
1 : rencontre Ac anti-Ag
2 : voyage sur baton
3 : rencontre autres Ac anti-Ag : 2 Ac de liés : couleur!
4 : Petite partie des Ac rejoignent anti-Ac placés après : s’assure que les Ac ont bien migré et que le strip fonctionne

Question 29

Le test dip stick est-il plus ou moins sensible qu’un ELISA?

Answer 29

Moins sensible, car pas d’amplification de signal par Ac secondaires

Question 30

Comment fonctionne le test dip-stick pour HIV?

Answer 30

Sert à savoir si une personne a les Ac contre HIV
1 - Dépôt de salive sur bâton
2 - Protéine A lie partie Fc de l’Ac et est couplée à de l’or colloidal
3 - Si Ac présent : lie Ag HIV (qui est plus loin sur le stick)
4 - contrôle du test : Ac anti-Ac humains au bout du test pour confirmer que le test fonctionne