Immunotechnique chap 5 Flashcards
Explique le test d’hémagglutination
Les globules rouges se déposent différemment dans le puits selon s’ils sont agglutinés ou pas : le réseau formé par l’agglutination couvre une plus grande surface.
Agglutination si liaison antigène anticorps
Explique le principe de l’immunobuvardage
Électrophorèse sur gel SDS-PAGE : Tout d’abord, les protéines de l’échantillon sont séparées par taille à l’aide de l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium (SDS), ce qui leur donne une charge nette négative en proportion de leur taille.
Transfert : Ensuite, les protéines séparées sont transférées sur une membrane, généralement en nitrocellulose ou en PVDF (polyvinylidène difluoride). Ce processus de transfert est souvent réalisé par électrotransfert, où un courant électrique est appliqué pour transférer les protéines du gel sur la membrane.
Blocage : La membrane est ensuite traitée avec une solution de blocage pour empêcher les anticorps de se lier de manière non spécifique à la membrane.
Incubation avec des anticorps : La membrane est incubée avec un anticorps primaire spécifique de la protéine d’intérêt. Cet anticorps se lie spécifiquement à la protéine cible.
Détection : Après avoir lavé la membrane pour éliminer les anticorps non liés, une réaction de détection est réalisée. Cela implique généralement l’incubation de la membrane avec un anticorps secondaire couplé à une enzyme, tel qu’une peroxydase de raifort (HRP). L’anticorps secondaire se lie à l’anticorps primaire et l’enzyme catalyse une réaction chimique avec un substrat spécifique, produisant un signal détectable, tel qu’une luminescence ou une couleur.
Analyse : Enfin, le signal généré est enregistré à l’aide d’un scanner ou d’autres dispositifs de détection d’image. La force du signal est corrélée à la quantité de protéine présente dans l’échantillon.
Comment fonctionne un RIA ? (radio immunoassay)
Technique pour quantifier des protéines
Principe : dans une série de tubes, on incube l’anticorps avec une quantité fixe de l’antigène radiomarqué et une quantité croissante de l’antigène non-marqué.
Celui-ci entre en compétition avec l’antigène marqué.
-» courbe d’étalonnage.on observe une baisse de radioactivité avec l’augmentation de la concentration de l’antigène non marqué
Comment fonctionne un ELISA ?(enzyme-linked immunoadsorbant assay)
Au lieu d’un pathogène lui-même, on cherche souvent à
confirmer la présence d’anticorps contre celui-ci. (HIV, p.e.)
- Purification d’un Ag du pathogène
- Attachement à un support solide
- Ajouter dilutions du sérum du patient
- Lavages et ajout d’un Ac II lié à une enzyme qui permettera la détection
- Réaction quantifiable
Décris l’immunofluorescence et le principe du FACS
Approche qui ajoute à un anticorps…
une molécule colorée (chromophore) ou une molécule fluorescente (fluorochrome)
La fluorescence est l’absorption d’un photon d’une certaine λ et la réémission d’un photon de λ plus longue (moins énergétique).
La FACS est largement utilisée en recherche biomédicale pour étudier la composition cellulaire, analyser les populations cellulaires hétérogènes, isoler des sous-populations cellulaires spécifiques et caractériser les propriétés fonctionnelles des cellules. Chaque type cellulaire se lie a un fluofore différents.
Comment fonctionne la technique de l’immunoprécipitation ?
L’immunoprécipitation (IP) est une technique utilisée en biologie moléculaire pour isoler une protéine spécifique ou un complexe protéique à partir d’un mélange de protéines. Cette méthode repose sur la capacité des anticorps à se lier spécifiquement à leur antigène cible.
comment fonctionnent les dip-sticks ?
Le principe du “dip-stick” (ou bandelette réactive) repose sur une méthode simple et rapide pour détecter la présence ou l’absence d’une substance spécifique dans un échantillon liquide. (Interaction antigène anticorps). Cette technique est moins sensible qu’un ELISA mais plus pratique et rapide.
