Immune Techniques

Question 1

מה מבחין בין ביולוגיה של התא לביולוגיה מולקולרית או ביוכימיה?

Answer 1

מעבר לפעילות של חלבון או קומפלקס מסוים, אנחנו רוצים גם להסתכל על המיקום התוך תאי שלו, כדי להבין איך הוא משתלב בתוך התפקוד של התא.

Question 2

מהם נוגדנים?

Answer 2

אימונוגלובינים המופרשים על ידי תאי B של מערכת החיסון

Question 3

כיצד נוגדנים נוצרים?

Answer 3

תאי B עוברים אקטיבציה, פרוליפרציה והתמיינות של התא, כך שיהפוך לתא אפקטורי שמפריש נוגדנים.

Question 4

מהם נוגדנים מונוקלונליים?

Answer 4

נוגדנים שנוצרו מתאים שהינם חלק משושלת זהה גנטית שבראשה עומד תא B.

Question 5

איך נותנים לתא B אפקטורי את היכולת להתרבות?

Answer 5

גורמים לו לעבור איחוי עם תא שיכול להתרבות (נגיד תא סרטני של עכבר) , נוצר הטרוקריון (תא עם שני גרעינים) ומהם נוצרים היברידומה (תא עם גרעין אחד שהוא ערבוב של התאים הקודמים). ההיברידומה יכולה גם להתרבות וגם ליצור נוגדנים. זה מבטיח יכולת התרבות ללא השתנות.

Question 6

מהם נוגדנים שניוניים?

Answer 6

נוגדנים שניוניים מזהים נוגדנים שמזהים אנטיגן כלשהו. ניתן לחבר לנוגדנים השניוניים סמנים כך שניתן יהיה לזהות אותם. יש כמה נוגדנים שניוניים שיכולים לזהות נוגדן ראשוני אחד, כך שנוצרת אמפליפיקציה של הסיגנל, הרגישות מוגברת.

Question 7

כיצד גורמים לאנטיגן בתוך תא מת להיות נגיש לנוגדן?

Answer 7

(צריך את זה כי הנוגדן לא בהכרח יכול להיכנס לתא)
נקבע את התא, נחרר אותו על ידי שימוש בדטרגנט, ואז נשים את הנוגדנים

Question 8

כיצד עובדים חומרים פלורצנטיים מבחינת בליעה והחזרה של אור?

Answer 8

יש אורכי גל מסוימים שאותם החומרים האלה בולעים בצורה מיטבית, ואורכי הגל שמוחזרים יהיו מעט ארוכים יותר, כי נאבדת אנרגיה בתהליך.

Question 9

באיזה שיטה נרצה להשתמש על מנת לחקור תאים במיקרוסקופ אור?

Answer 9

נוגדנים שניוניים עם פלורסנציה

Question 10

כיצד ניתן להשתמש בפלורסנציה בלי לחורר את התא?

Answer 10

חלבונים פלורסנציים כמו GFP -
מוסיפים לRNA של חלבון מסוים, לפי קודון העצירה, את הרצף המקודד לGFP, ואז נוצר חלבון המכיל את שניהם.

Question 11

כיצד מבצעים Immunoblot / Western blot?

Answer 11

לוקחים מיליוני תאים, ממיסים אותם, ומפרידים את התוכן החלבוני לפי גודל על ידי אלקטרופורזה, לאחר דנוטרציה, חומר מחזר ודטרגנט.
ההפרדה לפי גודל מאפשרת לכמת את האנטיגן.
לאחר ההפרדה מטביעים את הג׳ל אל ממברנה שקושרת חלבונים. אפשר לזהות חלבון ספציפי על גבי הממברנה בעזרת נוגדנים (המאפשרים לזהות כמות קטנה) או להוסיף כרומופנול בלו ואז אפשר לראות חלבונים בכמות גדולה.

Question 12

כיצד ניתן לבודד אנטיגן ספציפי מתוך תוכן של מיליוני תאים?

Answer 12

immunoprecipitation
בעזרת נוגדנים.
נחבר על הנוגדן משהו גדול (נגיד bead), הנוגדן יתחבר לאנטיגן, ובעזרת אמצעים פיזיקליים שונים יהיה ניתן לבודד אותם.

Question 13

אם בג׳ל אלקטרופורזה נראים שלושה קווים

Answer 13

בניסוי ככל הנראה זוהה רק חלבון מטרה אחד

Question 14

אם בSDS-PAGE סטודנט א קיבל שלושה קווים וסטודנט ב קיבל קו אחד (במיקום שזהה לאמצעי מהשלושה של סטודנט א)

Answer 14

אז ככל הנראה סטודנט א ביצע צביעת coomassie וסטודנט ב ביצע immunoblot

Question 15

לאחר הרצת תוצרי immunoprecipitation של חלבון מסוים בתנאים מחזרים, כמה פסים יופיעו? ואם הנוגדן נקשר לשני לחבונים בגדלים שונים?

Answer 15

3
לפחות 4

Question 16

בנוגדנים האזור שקושר אנטיגן נמצא בצד ה

Answer 16

N טרמינלי

Question 17

מה זה immunogold electron microscopy?

Answer 17

שיטה ברזולוציה גבוהה למיקום סלקטיבי של מאקרומולקולות בתוך תאים ומבנים תוך תאיים.
נעשה שימוש בנוגדנים שמחוברים לחלקיקי זהב.

Question 18

מה זה FACS?

Answer 18

אנליזה של תכולת DNA בעזרת flow cytometer
מאפשרת לכמת את כמות הDNA שיש בתא וכך לדעת באיזה שלב במחזור התא הוא נמצא

Question 19

בעזרת איזה מיקרוסקופ אפשר לזהות GFP?

Answer 19

אור, פלורנצטי
לא אלקטרונים

Question 20

ממה מורכב נוגדן IgG?

Answer 20

2 שרשראות קלות ו2 שרשראות כבדות