Gojenje celic in vitro

Question 1

Kaj je celična kultura?

Answer 1

Je gojenje celic izven telesa (in vitro), v takih pogojih da se lahko razmnožujejo, ohranjajo svoje oblike in funkcije ter se diferenciirajo.

Question 2

Kakšne celične kulture ločimo GLEDE NA CELICE?

Answer 2

1. tkivne kulture: Takrat, ko odvzameš majhen kos organa ali tkiva (1 mm). Gojiš lahko več vrst celic (ene hitreje rastejo, druge hitreje odmrejo…)
   - organotipična kultura (ohrani zgradbo tipično za nek organ)
   - histiotipična kultura (celice se povežejo in ustvarijo 3D obliko, ki je podobna nekemu tkivu)
2. kulture primarnih in sekundarnih celic
   Primarne kulture so odvzete neposredno iz telesa pacienta. (Prvič 1907, ko so vzeli del hrtenjače in limfo in so začeli rasti aksoni)
   Sekundarne celice so celične kulture, dobljene z razmnoževanjem primarnih celic v kulturi.
3. celične linije (nesmrtne celice, ki se v primernih pogojih lahko vzdržujejo v kulturi neomejen čas).

Question 3

Kakšne celične kulture ločimo GLEDE NA OBLIKO?

Answer 3

• suspenzijske
• 3D
• pritrjene (adherentne)=na podlagi

Question 4

Naštej prednosti in slabosti gojenja in vitro.

Answer 4

Prednosti:
-okolje je nadzorovano, lahko ga je spreminjati po želji
- poznamo tip celic
- lahko pridobimo velike količine celic
- lahko proučujemo različne celične funkcije
Slabosti:
- stroški
- velika verjetnost okužb-> sterilno delo
- nekatere celice je težko gojiti
- izgubimo diferenciirani fenotip
- razlike med in vivo in in vitro

Question 5

Kako pripravimo kulturo primarnih celic?

Answer 5

• Odvzem vzorca (biopsija)
• Izolacija celic (mehanično razbitje tkiva (razrežeš), obdelava s proteoliznimi encimi (kolagenaza ali tripsin)-ga razgradiš)
• Ločevanje celic (na podlagi velikosti/premera celic, prisotnosti značilnih antigenov na površini celic…)
• Gojenje celic in vitro (pogoji za rast (temperatura…), izbira medijev..)
• Transfekcija in imortalizacija (ni obvezen del priprave)

Question 6

Naštej vire celičnih linij.

Answer 6

Vir celičnih linij:

1. Kultura sekundarnih celic
2. transformirane celice
3. tumorske celice
4. matične celice

Question 7

Opiši vir celične linije: Kultura sekundarnih celic

Answer 7

Sekundarne celice pridobiš iz pritrjenih primarnih celic. Ko te primarne celice dosežejo 90-
100 % konfluentnost (prekritje podlage) jim dodaš tripsin in EDTA, ki prekineta njihovo
povezavo s podlago in jih lahko dvigneš in preneseš na nov hranilni medij v drugi posodi.
Njihova sposobnost delitve je determinirana z eno ali drugo možnostjo:
- redke genetske spremembe → imortalne (nesmrtne) celice
- Hayflickova limita-eksperimentalno določena meja, kolikokrat so se živalske celice sposobne deliti (30-50x), preden zaidejo v kritično periodo. Če celica preide kritično periodo postane nesmrtna.

Question 8

Opiši vir celične linije: Transformirane celice

Answer 8

Genetske spremembe (obsevanje, kemični kancerogeni, tumorski virusi, transfekcija z onkogenimi geni). S temi pridobiš nesmrtne celice. Primer: linija COS-7

Question 9

Opiši vir celične linije: Tumorske celice

Answer 9

Vzameš vzorec tumorja. Primer: HeLa celice (cervikalni karcinom; Henrietta Lacks, 1951)

Question 10

Opiši vir celične linije: Matične/izvorne celice

Answer 10

Značilnosti:
- nespecializirane celice
- sposobnost dolgotrajnega ohranjanja v kulturi z delitvijo
- ustrezni fiziološki ali poskusni pogoji spodbudijo diferenciacijo v specializirane celične tipe
Oblike matičnih celic:
- Tkivne matične celice (matične celice izolirane iz odraslih osebkov (popkovna kri, maščobno tkivo, zobna pulpa → omogočajo avtotransplantacijo)
- Embrionalne matične celice (iz embrionalnega vozla)
- inducirane matične celice

Question 11

Kaj so REKOMBINANTNE TRANSFECIRANE

CELIČNE LINIJE ?

Answer 11

So linije, ko tujo DNA vnesemo v evkariontsko celico. To je lahko tako, da se DNA vnese v jedro, a se ne vključi v kromosom (prehodni način) ali pa tako da DNA postane del celičnega kromosoma / postane episom.

Question 12

Kako delujejo platforme brez ogrodja? Kaj nastane, kako?

Answer 12

Na neko platformo nakapamo suspenzijo celic. Te se delijo, nastane viseča kaplja. Celice se povežejo v agregat. Iz tega nastane sferoid. Sferoid je omejen v velikosti. Če je prevelik začnejo celice v notranjosti odmirat, ker ne pridejo do hranilnih snovi.

Question 13

Za kaj se uporabljajo platforme z ogrodji?

Answer 13

Za funkcionalne vsadke za klinično in regenerativno medicino, in vitro za laboratorijske namene.

Question 14

Kaj so organoidi, kaj so njihove prednosti? Kako jih pridobivamo?

Answer 14

So 3D celični skupki, ki so sposobni SAMOOBNAVLJANJA, SAMOORGANIZACIJE in POSNEMAJO FUNKCIONALNOST ORGANA.
Njihove prednosti so da so podobni primmarnim tkivom, dobro imitirajo pogoje in vivo, so stabilni sistemi za podaljšano gojenje.
Pridobivamo jih iz tumorskih organov / tkiv oz. iz matičnih celic.

Question 15

Kako so zgrajeni mediji za gojenje celic in vitro?

Answer 15

• iz OH (glukoza)
• aminokislin
• anorganskih soli
• vitaminov
• indikatorja pH
  POMOŽNO: serum (goveji/žrebičkov) zaradi rastnih faktorjev, antibiotiki

Question 16

Kako poteka rast celic v kulturi (faze in njihove značilnosti)

Answer 16

Najprej je faza lag (št. celic se ne spreminja), sledi faza rasti (št. celic narašča-delitve), po njej je stacionarna faza (konfluentnca je tu skoraj 100%-> zmanjka hranilnega medija), na koncu je faza propada. Če v stacionarni fazi celice presadimo na novo gojišče ni faze propada (celice odlepiš če so pritrjene, razbijemo vezi med njimi, jih razredčimo v mediju in damo na novo gojišče)