GENOMICA . PRC Flashcards
QUIEN DESCUBRIO LA PCR?
Kary Mullis 1983-1985
VENTAJAS DE LA PCR?
- Rapidez
- Alta sensibilidad
- Alta especificidad
- Detccion a partir de cualquier muestra biologica
- no es necesaria una muestra estéril
- deteccion de patogeno en general aun en presencia de
CUALES SON LOS COMPONENTES DE UNA PCR?
- Nucleotidos
- Primers
- Buffers
- DNA templado
- Taq polymerase
CUALES SON LAS ETAPAS DE LA PCR?
- -Desnaturalizacion
- -Extension (elongacion)
- -Alineacion de los primers (único que cambia la temperatura)
- -Desnaturalizacion
EL NUMERO DE COPIAS DEL DNA DELIMITADO POR LOS PRIMERS SE DUPLICA EN CADA CICLO DE LA PCR??
Verdadero
QUE HACE LA TAQ-POLIMERASA??
Enzima termoestable capaz de colocar nucleotidos desde el extremo 3’ de un cebador
CUAL ES LA FINALIDAD DEL TERMOCICLADOR?
Realiza los diferentes pasos de la PCR
LA PCR NORMAL SIRVE PARA CUANTIFICAR?
FALSO, EL UNICO QUE CUANTIFICA ES PCR TIEMPO REAL
QUE SE REALIZA EN PCR NESTED?
Dos rondas de amplificación con diferentes pares de primers.
VENTAJAS DE LA PCR NESTED?
- Especificidad
- Sensibilidad
QUE DETECTA LA RT-PCR?
Detection de la expresión de un gen por presencia de mRNA
QUE ENZIMA SE USA EN RT-PCR?
Reversotranscriptasa
QUE HACE LA PCR-MULTIPLE?
Usa multiples primers en una reacción para amplificar diferentes templados de DNA presentes en la muestra.
POR CADA GEN SE COLOCAN 2 OLIGOS EN PCR-MULTIPLE?
Verdadero
EN PCR MULTIPLEX SE PUEDEN DETECTEAR VIRUS, BACTERIAS Y HONGOS EN UNA MISMA MUESTRA??
Verdadero
VENTAJAS DE PCR MULTIPLEX?
-Resultado en 24 hrs
-Identificacion multiple, sensible, eficaz y rápida
-Alta sensibilidad
-
QUE PUEDE DETECTAR LA PCR MULTIPLEX?
-Paneles para meningitis
-Paneles para diarrea
-Virus respiratorios
-Neumobacterias
-Infecciones de transmisión sexual
-
SE UTILIZA COMO MARCADORES EN LA CONSTRUCCION DE MAPAS FISICOS Y DE LIGAMENTOS
PCR-RFLP
QUIEN DETECTA DETECCIONES PUNTUALES?
PCR-RFLP
PARA QUE ESTUDIOS PRECONCEPCIONALES SE PUEDEN DETECTAR CON PCR-RFLP??
- Desprendimiento placentario
- Trombosis
- Abortos en el primer trimestre
- Riesgo de espina bifida
QUE PRUEBA DETECTA EL ANTIGENO ESPECIFICO POR EL ANTICUERPO ESPECIFICO?
Immune-PCR
DIFERENCIA ENTRE PCR-TIEMPO REAL Y PCR-CONVENCIONAL
Punto final puede detectar hast 200 microorganismos y tiempo real 6 canales (sondas)
QUE DETECTA LA PRUEBA ELISA?
Prueba rapida para detector VIH
QUE PERMITE LA PCR EN TIEMPO REAL?
- Observar la cinetica de la reaccion.
- Cuantificacion de la expresion de genes o re ordenamientos. (mDNA, RNA Y DNA)
- Mas rapida y menos laboriosa
- Identificacionde mutaciones puntuales
CUALES SON LOS TIPOS DE PCR EN TIEMPO REAL?
- Cuantitativa
* Cinetica
Como se monitor una PCR EN TIEMPO REAL?
Por medio de fluorescencia
CUALES SON LOS REACTIVOS FLUORESCENTES QUE SE REALIZAN EN PCR DE TIEMPO REAL?
- SYBR-GREEN
- BEACON
- TaqMan
- FRET
- Scorpion
CARACTERISTICAS DE SYBR GREEN
- Molecula fluorescente que se intercala en el DNA
- Mas communmente
- Alta sensibilidad
- Menor costo
EN SYBR GREEN LA ESPECIFICIDAD ESTA DADA POR LOS PRIMERS?
VERDADERO
CUAL ES LA FUNCION DE LOS “REPORTER” EN UNA SONDA TAQ-MAN?
Fluoroforo que emite una determinada longitud de onda
CUAL ES LA FUNCION DE “QUENCHER” EN UNA SONDA DE TAQ-MAN?
Absorbe la luz emitida por el reporter
TAQ-MAN SE COME LA SONDA Y EL QUENCHER FLUORECE, SE DESPRENDE EL REPORTERO?
VERDADERO
LAS SONDAS FRET, PERMITEN VER SI HAY UN NUCLEOTIDO DE DIFERENCIA?
VERDADERO
CARACT DE LAS SONDAS FRET
- DOS OLIGOS (EXCITADOR / AMPLIFICADOR)
- NO AMPLIFICA
- PUEDE VER CARGAS VIRALES
EN SCORPION, QUE ES EL LOOP?
La secuencia que se esta buscando
CUALES SON LOS OBJETIVOS DE LA REAL-TIME REVERSOTRANSCRIPTASA PCR?
- Detección de la expresión de un gen
- Cuantificación de cargas vitales
CUALES SON LAS ETAPAS DE LA REACCION DE AMPLIFICACION?
- Exponencial
- Lineal
- Plateau
- Detección de la PCR tradicional
ENTRE MAS DNA TENGAS MENOR CT HABRA? Y POR QUE?
SI, POR QUE ES INVERSAMENTE PROPORCIONAL
CUALES SON LAS MANERAS DE CUANTIFICAR?
- Absoluta: resultado con unidades, cuantificación de virus
* Relativa: Porcentaje de incremento o disminución, genes housekeeping
QUE DETERMINA LA CURVA MELTING?
Indica el pico mutante
1 pico; heterocigoto 2 picos: homocigoto
DE QUE DEPENDE LA TM?
- Secuencia
- Tamaño
CARACT. DE LA PCR DIGITAL?
- Muy especifica
- Analiza celula por celula
- Muy sensible
- Cuantitativa
APLICACIONES DE LAS DIFERENTES PCR’s?
- Detccion
- Monitoreo
- Progresion de una enfermedad
CARACT. DE PCR EN TIEMPO REAL:
- Alta tecnologia
- cuantitativa
- sensible
- Requiere menor cant de muestra
