Extracción y purificación del DNA Flashcards
Objetivos de la extracción y purificación del DNA
I. Comprender los principios moleculares de la purificación del DNA
II. Describir las generalidades de los diversos mecanismos de extracción del DNA
III. Comprender la necesidad de la extracción del DNA para su uso en pruebas diagnosticas
Características del DNA
El ADN está constituido por dos cadenas de nucleótidos unidas entre sí formando una doble hélice. Los nucleótidos
están integrados por un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina)
Técnica de extracción (la mayoría de las veces se utiliza una combinación de todos estos métodos)
¿Cuáles son los métodos?
Químicos
Físicos
Mecánicos
Enzimáticos
¿Cuáles son los pasos de la técnica de extracción?
Extracción
Purificación
Precipitación
De qué paso estamos hablando:
Lisis celular para liberar el DNA del núcleo celular
Extracción
¿Cuáles son los métodos de la extracción?
Químicos: detergentes (sodio dodecil sulfato :SDS)
Físicos: calor
Enzimáticos: Proteinasa K
(Extracción)
Método químico: Buffer de lisis
Degrada la membrana celular capturando lípidos y proteínas, evitando que el DNA quede atrapado en los restos celulares
Detergente SDS
(Extracción)
Método químico: Buffer de lisis
EDTA: Molécula ________, que posee 4 grupos carboxilos y dos grupos amino y tiene la función de unirse a iones _______, el magnesio funciona como un cofactor de las enzimas que degradan el DNA como las _______, por lo tanto al agregar el EDTA estas son inhibidas protegiendo así el DNA
Quelante
Magnesio
Nucleasas
(Extracción)
Método químico: buffer de lisis
NaCl:
Algunas sales como el _______________________ forman una capa iónica suave que recubre el DNA y así lo protege y ayuda a evitar su __________, además de _________ y ________ proteínas celulares
Cloruro de sodio
Degradación
Deshidratar
Precipitar
(Extracción)
Método químico: buffer de lisis
Tris HCL:
Es una ____________________ que mantiene el pH de la solución estable, aproximadamente entre _____ y ____
Solución buffer
7.5 y 8.2
(Extracción) Método enzimático
Es una enzima que permite degradar proteínas y otras enzimas como las nucleasas, de esta forma ayuda a purificar cada vez mas el DNA
Proteinasa K
Incubación
Una vez agregado el _____________ y la ________, se realiza una incubación entre ________________ durante ________, la incubación facilita la ruptura de los lípidos de la membrana celular
Buffer de lisis
Proteinasa
50 y 70° C
10 minutos
¿Cuáles son los buffer de lisis que se pueden agregar en el método químico de la extracción?
Detergente SDS
EDTA
NaCl
Tris HCL
Paso de la técnica de extracción en donde hay eliminación de proteínas y lípidos de membrana mediante el uso de solventes orgánicos como el fenol y el cloroformo, centrifugación o sedimentación
Purificación
Paso de la técnica de extracción que se lleva acabo agregando etanol absoluto frio, el cual elimina las sales
agregadas anteriormente y permite que el DNA se visualice como una fibra blanca
Precipitación
