Enzimas de restricción Flashcards
¿Qué son las enzimas de restricción?
Son enzimas bacterianas que reconocen y cortan secuencias específicas de DNA
Usos de las enzimas de restricción
• Biología molecular
• Diagnóstico clínico
• Clonación
• Secuenciación
• Estudio de polimorfismos
Las enzimas de restricción son producidas por las
__________ como un ______________________ contra las
infecciones víricas, concretamente contra virus
bacteriófagos, cuya reproducción depende de la
maquinaria genética de la bacteria.
Bacterias
Mecanismo de defensa
¿Cuáles son los mecanismos de defensa?
• El DNA propio de la bacteria es metilado de una forma específica
• La metilación de las bases impide la unión de la enzima de restricción, con lo que el DNA propio no es hidrolizado.
• Por el contrario, al entrar en la célula DNA de otro organismo, no metilado o con un patrón de metilación diferente, este DNA puede ser degradado
por la enzima de restricción
La restrictasa actúa sobre sitios ______________, y la metilasa actúa sobre sitios _____________, reconociendo ambas la misma secuencia
NO metilados
NO cortados
DNA NO metilado
con sitio de restricción para EcoRI
5’ -G-A-A-T-T-C-3’
3’ -C-T-T-A-A-G-5’
EcoRI corta el DNA
DNA metilado
En una adenina especifica del sitio de restricción para EcoRI (en ambas hebras)
5’ -G-A-A (m) -T-T-C-3’
3’ -C-T-T-A (m) -A-G-5’
Los grupos metilo impiden la interacción de EcoRI: el DNA queda intacto
¿Qué tipo de enzimas de restricción son las más estudiadas debido a su utilidad en el campo de la biología molecular, sobre todo en el área de genética molecular?
Tipo II
Las secuencias de reconocimiento de las enzimas de restricción _________ tienen una _______________, es decir, dichas secuencias se leen igual en ambas cadenas del DNA en dirección _________
Tipo II
Simetría palindrómica
5’ – 3’
Las enzimas tipo II:
a. Sólo tienen actividad de restricción
b. Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que reconocen
Las _____________ se nombran a partir de las bacterias de las que son extraídas, su nombre está dado según el ______y la _________de la bacteria de donde se aisló por primera vez esta enzima
Endonucleasas
Género
Especie
La primera letra representa el _____ de la bacteria, las próximas dos indican la _____, una cuarta letra indica la _____, y un número al final indica la ______________que se han _______ de esa cepa
Ej:
Eco RI à E = género Escherichia
co = especie coli
R = cepa RV 13
I = primera endonucleasa aislada de esta cepa
Género
Especie
Cepa
Cantidad de enzimas
Aislado
Al cortar el ADN, las enzimas de restricción pueden producir dos tipos de cortes:
Cohesivos (o pegajosos)
Abruptos o romos
Cortan a manera escalonada
Cortes cohesivos o pegajosos
Cortan a las dos cadenas del ADN en el mismo lugar
Cortes abruptos o romos
¿Qué significa RFLP?
Polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción
ha sido una herramienta en el análisis de ADN en medicina forenses por muchos años
Los polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP)
El análisis RFLP se basa en:
un patrón de bandas único en los sitios de restricción presentes en la secuencia de ADN de un individuo
Posteriormente se comparan los patrones de banda producidos por la acción de las enzimas de restricción sobre las muestras de ADN, las bandas son separadas en un ____________________ (RFLP)
Gel de agarosa
