Enzimas de restricción Flashcards
¿Qué son las enzimas de restricción?
Son enzimas bacterianas que reconocen y cortan secuencias específicas de DNA
Usos de las enzimas de restricción
• Biología molecular
• Diagnóstico clínico
• Clonación
• Secuenciación
• Estudio de polimorfismos
Las enzimas de restricción son producidas por las
__________ como un ______________________ contra las
infecciones víricas, concretamente contra virus
bacteriófagos, cuya reproducción depende de la
maquinaria genética de la bacteria.
Bacterias
Mecanismo de defensa
¿Cuáles son los mecanismos de defensa?
• El DNA propio de la bacteria es metilado de una forma específica
• La metilación de las bases impide la unión de la enzima de restricción, con lo que el DNA propio no es hidrolizado.
• Por el contrario, al entrar en la célula DNA de otro organismo, no metilado o con un patrón de metilación diferente, este DNA puede ser degradado
por la enzima de restricción
La restrictasa actúa sobre sitios ______________, y la metilasa actúa sobre sitios _____________, reconociendo ambas la misma secuencia
NO metilados
NO cortados
DNA NO metilado
con sitio de restricción para EcoRI
5’ -G-A-A-T-T-C-3’
3’ -C-T-T-A-A-G-5’
EcoRI corta el DNA
DNA metilado
En una adenina especifica del sitio de restricción para EcoRI (en ambas hebras)
5’ -G-A-A (m) -T-T-C-3’
3’ -C-T-T-A (m) -A-G-5’
Los grupos metilo impiden la interacción de EcoRI: el DNA queda intacto
¿Qué tipo de enzimas de restricción son las más estudiadas debido a su utilidad en el campo de la biología molecular, sobre todo en el área de genética molecular?
Tipo II
Las secuencias de reconocimiento de las enzimas de restricción _________ tienen una _______________, es decir, dichas secuencias se leen igual en ambas cadenas del DNA en dirección _________
Tipo II
Simetría palindrómica
5’ – 3’
Las enzimas tipo II:
a. Sólo tienen actividad de restricción
b. Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que reconocen
Las _____________ se nombran a partir de las bacterias de las que son extraídas, su nombre está dado según el ______y la _________de la bacteria de donde se aisló por primera vez esta enzima
Endonucleasas
Género
Especie
La primera letra representa el _____ de la bacteria, las próximas dos indican la _____, una cuarta letra indica la _____, y un número al final indica la ______________que se han _______ de esa cepa
Ej:
Eco RI à E = género Escherichia
co = especie coli
R = cepa RV 13
I = primera endonucleasa aislada de esta cepa
Género
Especie
Cepa
Cantidad de enzimas
Aislado
Al cortar el ADN, las enzimas de restricción pueden producir dos tipos de cortes:
Cohesivos (o pegajosos)
Abruptos o romos
Cortan a manera escalonada
Cortes cohesivos o pegajosos
Cortan a las dos cadenas del ADN en el mismo lugar
Cortes abruptos o romos
