Exercice 10-ligation of restriction fragments of genomic DNA and plasmid vector Flashcards
que se passe pendant la ligation? quel liaison est formée
la ligation produit une liaison phosphodiester entre le 3’-OH et le 5’-P de 2 molécules d’ADN
quelle enzyme effectue la ligation
ADN ligase
4 composantes qui sont requises pour une bonne réaction de ligation
1) 5’-P et 3’-OH adjacents
2) Mg2+
3) ATP
4) conditions d’incubations adéquats
comment le ratio insert:vecteur affecte la réaction de ligation et les produits de ligation
plus que la concentration en I est grande, plus il y a de probabilités d’interaction avec le vecteur. Aussi, il est plus probable de former une ligation I+V quand la concentration de I est plus grande que celle de V
que peut arriver si la concentration de I est trop grande par rapport au V
il y aura une formation de molécules recombinantes qui contiennent plus qu’un insert ( concatamers)
