Exercice 6-midi prep for plasmid DNA

Question 1

2 différences entre l’ADN chromosomal et plasmidique dans une bactérie

Answer 1

1) chromosomes bactériens sont plus grands que ceux des plasmides
2) l’ADN bactérien va casser en petit fragments lors de sa manipulation tandis que l’ADN chromosomal va rester dans sa former supercoiled

Question 2

comment augmenter le nombre de copies du plasmide sans augmenter le nombre de copies d’ADN chromosomique chez les bactéries

Answer 2

en ajoutant un antibiotique penadant la phase log pour bloquer la réplication de l’ADN chromosomique, mais sans bloquer la réplication des plasmides.
Cela sera suivi d’une période d’incubation de quelques heures pour augmenter le nombre de plasmides par cellules

Question 3

3 composantes du plasmide pBR322

Answer 3

1) résistance à l’ampiciline
2) résistance à la tetracycline
3) origine de réplication

Question 4

4 composantes du plasmide pGEM

Answer 4

1) résistance à l’ampiciline
2) ori
3) gène LacZ α pour l’α-complémentation
4) F1 ori

Question 5

c’est quoi le PM pour le plasmide lambda

Answer 5

environ 48,5 kb

Question 6

l’ADN et l’ARN sont absorbés à quelle longueur d’onde?

Answer 6

260nm

Question 7

comment caractériser la purété de l’ADN avec des longueurs d’ondes autre que 260nm

Answer 7

en utilisant l’absorbance à 320nm.
elle doit être 5% de la valeur de l’absorbance de A260 et sinon=présence de contaminants/cuvette sale

Question 8

les protéines sont absorbés à quelle longueur d’onde

Answer 8

280nm

Question 9

comment le ratio A260/A280 est utilisé

Answer 9

la valeur doit être entre 1,8 et 1,9.
ratio haut=contamination d’ARN
ratio bas= contamination de protéines

Question 10

quel autre ratio peut être utilisé pour voir s’il y a présence de contamination protéique autre que le A260/A280

Answer 10

le ratio A234/A260 car les acides nucléiques ont une absorbance minimale à 234nm
Si le ratio est plus grand que 0.5, il y a une contamination protéique